公开(公告)号：CN109234337A

公开(公告)日：2019-01-18

申请号：CN201811073927.2

申请日：2018-09-14

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 贾红华 ,  李艳 ,  蔡如鑫 ,  严明 ,  陈可泉

IPC: C12P19/18 ,  C12P19/60

Abstract: 本发明公开了一种一种槲皮素糖苷的生物合成方法,将糖基转移酶UGT73G1或者其突变体的基因与蔗糖合酶基因连接得到重组质粒，构建含双酶体系的重组菌；将重组菌接种于LB液体培养基中，25~40℃，培养至OD600达到2-3时，添加诱导剂乳糖诱导12~20h，发酵液离心收集菌体，菌体破碎，离心收集上清液得到粗酶液；将槲皮素或异槲皮素溶于DMSO中，加入粗酶液、蔗糖，反应8-30h，加入甲醇终止反应，离心得上清槲皮素-3，4’-二葡萄糖糖苷。所述糖基转移酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO：1所示氨基酸序列发生突变的氨基酸序列，突变的氨基酸位点选自S151，T168，K274，T293，G361,S365,V371及F381中的一个或多个。该突变体制备简单，产量大，实现了槲皮素-3，4’二葡萄糖糖苷产量的提高。

公开(公告)号：CN115896216A

公开(公告)日：2023-04-04

申请号：CN202211451601.5

申请日：2022-11-18

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 李艳 ,  贾红华 ,  何惠畅 ,  丁佳杰 ,  陶叶慧 ,  蔡如鑫 ,  贺晓英 ,  徐娇娇

IPC: C12P19/60 ,  C12P19/18 ,  C12N9/10

Abstract: 本发明公开了一种槲皮素‑3,4'‑O‑二葡萄糖苷的合成方法及其所用到的酶，以拟南芥（Arabidopsis thaliana）来源的UGT78D2和洋葱（Allium cepa）来源的UGT73G1突变体73G1_V371A为研究对象，利用蛋白质工程手段改造UGT78D2区域选择性以及73G1_V371A可溶性表达。同时引入蔗糖合酶（Sucrose synthase，SuSy），分别与73G1_V371A和UGT78D2及其突变体构成偶联体系，实现UDPG循环再生，并对SuSy的磷酸化突变进行了比较研究。最终搭建三酶共表达催化体系S31D‑F378S‑V371A，以槲皮素和蔗糖为底物催化合成Q3,4'G，转化合成Q3,4'G的量为4.4±0.03 g/L，产槲皮素‑3,4＇‑O‑二葡萄糖苷的产量较原始酶有显著的提高。

公开(公告)号：CN109234337B

公开(公告)日：2021-09-03

申请号：CN201811073927.2

申请日：2018-09-14

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 贾红华 ,  李艳 ,  蔡如鑫 ,  严明 ,  陈可泉

IPC: C12P19/18 ,  C12P19/60

Abstract: 本发明公开了一种槲皮素糖苷的生物合成方法,将糖基转移酶UGT73G1突变体的基因与蔗糖合酶基因连接得到重组质粒，构建含双酶体系的重组菌；将重组菌接种于LB液体培养基中，培养，添加诱导剂乳糖诱导，发酵液离心收集菌体，菌体破碎，离心收集上清液得到粗酶液；将槲皮素或异槲皮素溶于DMSO中，加入粗酶液、蔗糖，反应，离心得上清槲皮素‑3，4’‑二葡萄糖糖苷。所述糖基转移酶UGT73G1突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO:1所示序列发生V371A和/或F381Y突变的氨基酸序列。该突变体制备简单，产量大，实现了槲皮素‑3，4’二葡萄糖糖苷产量的提高。