一种PEDV高嗜性单克隆细胞株及其应用

    公开(公告)号:CN117660299A

    公开(公告)日:2024-03-08

    申请号:CN202311450738.3

    申请日:2023-11-03

    Abstract: 本发明公开了一种PEDV高嗜性单克隆细胞株及其应用,该细胞株Vero‑B6于2023年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,菌种保藏编号为:CGMCC NO.45622。本发明筛选出一株对PEDV易感的Vero细胞,对筛选出来的Vero‑B6细胞系的相关特性做系列的鉴定,结果显示,Vero‑B6细胞传代到25代,每一代细胞均能贴壁良好,细胞传代稳定,接种PEDV后,发现对PEDV的易感性也比较稳定,说明细胞特性在传代过程中保持稳定,且该细胞不含细菌、真菌、支原体及某些外源病毒污染,该细胞系可用于实验室病原和疫苗相关研究。

    一种PDCoV JS2021-LX毒株NS6基因缺失重组病毒及其构建方法

    公开(公告)号:CN119979482A

    公开(公告)日:2025-05-13

    申请号:CN202411970800.6

    申请日:2024-12-30

    Abstract: 本发明公开一种PDCoV JS2021‑LX毒株NS6基因缺失重组病毒及其构建方法,基于BAC系统成功构建的PDCoV JS2021‑LX毒株感染性克隆,采用CRISPR/Cas9技术对其NS6基因的上下游进行切割,之后通过同源重组的方式将原NS6基因片段替换成绿色荧光蛋白EGFP,得到NS6基因缺失的重组质粒,转染LLC‑PK1细胞后拯救出缺失NS6蛋白的重组病毒。本发明成功拯救出了一株PDCoV NS6基因缺失的重组病毒,通过体内和体外两方面评估重组病毒和拯救病毒的病毒复制水平,猪体实验结果表明,该重组病毒致病性降低,具有作为弱毒活疫苗候选毒株的潜力。

    一种PDCoV JS2021-LX毒株NS7基因突变重组病毒及其构建方法

    公开(公告)号:CN119979481A

    公开(公告)日:2025-05-13

    申请号:CN202411970782.1

    申请日:2024-12-30

    Abstract: 本发明公开一种PDCoV JS2021‑LX毒株NS7基因突变重组病毒及其构建方法,基于BAC系统成功构建的PDCoV感染性克隆,采用CRISPR/Cas9技术对其NS7基因的上下游进行切割,之后通过同源重组的方式将原NS7基因片段进行替换,得到NS7基因突变的重组质粒,转染LLC‑PK1细胞后拯救出突变NS7蛋白的重组病毒。本发明成功拯救出了一株PDCoV NS7基因突变的重组病毒,通过体内和体外两方面评估重组病毒和拯救病毒的病毒复制水平,猪体攻毒实验结果表明,该重组病毒对猪体具有感染性,且毒力与野毒相当,该重组病毒可以作为标记灭活疫苗的候选毒株。

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