公开(公告)号：CN119979481A

公开(公告)日：2025-05-13

申请号：CN202411970782.1

申请日：2024-12-30

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王先炜 ,  张杨杨 ,  朱慧欣 ,  杨振 ,  姜平

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/50 ,  C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开一种PDCoV JS2021‑LX毒株NS7基因突变重组病毒及其构建方法，基于BAC系统成功构建的PDCoV感染性克隆，采用CRISPR/Cas9技术对其NS7基因的上下游进行切割，之后通过同源重组的方式将原NS7基因片段进行替换，得到NS7基因突变的重组质粒，转染LLC‑PK1细胞后拯救出突变NS7蛋白的重组病毒。本发明成功拯救出了一株PDCoV NS7基因突变的重组病毒，通过体内和体外两方面评估重组病毒和拯救病毒的病毒复制水平，猪体攻毒实验结果表明，该重组病毒对猪体具有感染性，且毒力与野毒相当，该重组病毒可以作为标记灭活疫苗的候选毒株。

公开(公告)号：CN119979482A

公开(公告)日：2025-05-13

申请号：CN202411970800.6

申请日：2024-12-30

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王先炜 ,  张杨杨 ,  朱慧欣 ,  杨振 ,  姜平

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/50 ,  C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开一种PDCoV JS2021‑LX毒株NS6基因缺失重组病毒及其构建方法，基于BAC系统成功构建的PDCoV JS2021‑LX毒株感染性克隆，采用CRISPR/Cas9技术对其NS6基因的上下游进行切割，之后通过同源重组的方式将原NS6基因片段替换成绿色荧光蛋白EGFP，得到NS6基因缺失的重组质粒，转染LLC‑PK1细胞后拯救出缺失NS6蛋白的重组病毒。本发明成功拯救出了一株PDCoV NS6基因缺失的重组病毒，通过体内和体外两方面评估重组病毒和拯救病毒的病毒复制水平，猪体实验结果表明，该重组病毒致病性降低，具有作为弱毒活疫苗候选毒株的潜力。