公开(公告)号：CN102443564B

公开(公告)日：2013-06-19

申请号：CN201110402964.5

申请日：2011-12-07

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  高永彬 ,  王春雷 ,  周宏胜 ,  吴俊 ,  陶书田 ,  齐开杰

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种提取梨花粉管细胞核的方法，包括以下步骤：1)采集花粉：采集大蕾期花药，干燥；2)花粉培养；3)细胞核的释放：单细胞筛研磨和双细胞筛过滤释放细胞核；4)细胞核纯化：采用Percoll密度梯度离心；5)清洗Percoll。该方法不涉及酶解提取原生质体，及传统研磨过滤技术。该方法具有操作简便、快捷、成本低、提纯效果明显等优点。提纯后的细胞核几乎没有细胞质部分污染，不仅可以应用DNA纤维制备，还可以应用于细胞核蛋白质组学研究，对于研究梨花粉管生长代谢及自交不亲和反应具有重要的意义。

公开(公告)号：CN102443564A

公开(公告)日：2012-05-09

申请号：CN201110402964.5

申请日：2011-12-07

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  高永彬 ,  王春雷 ,  周宏胜 ,  吴俊 ,  陶书田 ,  齐开杰

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种提取梨花粉管细胞核的方法，包括以下步骤：1)采集花粉：采集大蕾期花药，干燥；2)花粉培养；3)细胞核的释放：单细胞筛研磨和双细胞筛过滤释放细胞核；4)细胞核纯化：采用Percoll密度梯度离心；5)清洗Percoll。该方法不涉及酶解提取原生质体，及传统研磨过滤技术。该方法具有操作简便、快捷、成本低、提纯效果明显等优点。提纯后的细胞核几乎没有细胞质部分污染，不仅可以应用DNA纤维制备，还可以应用于细胞核蛋白质组学研究，对于研究梨花粉管生长代谢及自交不亲和反应具有重要的意义。

公开(公告)号：CN104388380B

公开(公告)日：2017-07-04

申请号：CN201410757802.7

申请日：2014-12-10

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  周宏胜 ,  吴巨友 ,  高永彬 ,  陶书田 ,  齐开杰 ,  陈建清

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种分离纯化梨花粉管液泡的方法，主要包括花粉采集、花粉培养、原生质体释放、原生质体纯化、液泡分离、液泡纯化等步骤。该方法用中性红2次染色方法可在光学显微镜下清楚地区分花粉粒、液泡、原生质体和水泡。本发明的优点在于：提取方法快速、简单，液泡膜表面光滑，污染程度小，所需材料和药品极少，不仅可以应用于膜片钳研究，还可以进一步应用于液泡蛋白质组学研究。

公开(公告)号：CN104388380A

公开(公告)日：2015-03-04

申请号：CN201410757802.7

申请日：2014-12-10

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  周宏胜 ,  吴巨友 ,  高永彬 ,  陶书田 ,  齐开杰 ,  陈建清

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种分离纯化梨花粉管液泡的方法，主要包括花粉采集、花粉培养、原生质体释放、原生质体纯化、液泡分离、液泡纯化等步骤。该方法用中性红2次染色方法可在光学显微镜下清楚地区分花粉粒、液泡、原生质体和水泡。本发明的优点在于：提取方法快速、简单，液泡膜表面光滑，污染程度小，所需材料和药品极少，不仅可以应用于膜片钳研究，还可以进一步应用于液泡蛋白质组学研究。