公开(公告)号：CN100587062C

公开(公告)日：2010-02-03

申请号：CN200810023305.9

申请日：2008-04-08

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  王春雷 ,  陈功 ,  吴俊 ,  吴华清

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明涉及一种梨花粉管中分离和纯化线粒体的方法，属于生物技术领域。包括花粉的采集、培养，线粒体提取液的配制、清洗液的配制、Percoll梯度的配制以及花粉管线粒体分离过程，将培养好的花粉管用细胞筛过滤，添加线粒体提取液研磨，获得细胞质液体，振荡离心后，用Percoll梯度液纯化、清洗获得线粒体。采用本方法获得完整的具有活力的花粉管的线粒体，提高了线粒体分离纯化效率。这种从微量花粉管中分离纯化线粒体技术，适合于作为花粉管的生理生化及细胞遗传等实验材料。对于研究开发花粉管的快速生长、以及不亲和花粉管的生长抑制技术将具有重要意义。

公开(公告)号：CN101265461A

公开(公告)日：2008-09-17

申请号：CN200810023305.9

申请日：2008-04-08

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  王春雷 ,  陈功 ,  吴俊 ,  吴华清

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明涉及一种梨花粉管中分离和纯化线粒体的方法，属于生物技术领域。包括花粉的采集、培养，线粒体提取液的配制、清洗液的配制、Percoll梯度的配制以及花粉管线粒体分离过程，将培养好的花粉管用细胞筛过滤，添加线粒体提取液研磨，获得细胞质液体，振荡离心后，用Percoll梯度液纯化、清洗获得线粒体。采用本方法获得完整的具有活力的花粉管的线粒体，提高了线粒体分离纯化效率。这种从微量花粉管中分离纯化线粒体技术，适合于作为花粉管的生理生化及细胞遗传等实验材料。对于研究开发花粉管的快速生长、以及不亲和花粉管的生长抑制技术将具有重要意义。

公开(公告)号：CN102443564B

公开(公告)日：2013-06-19

申请号：CN201110402964.5

申请日：2011-12-07

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  高永彬 ,  王春雷 ,  周宏胜 ,  吴俊 ,  陶书田 ,  齐开杰

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种提取梨花粉管细胞核的方法，包括以下步骤：1)采集花粉：采集大蕾期花药，干燥；2)花粉培养；3)细胞核的释放：单细胞筛研磨和双细胞筛过滤释放细胞核；4)细胞核纯化：采用Percoll密度梯度离心；5)清洗Percoll。该方法不涉及酶解提取原生质体，及传统研磨过滤技术。该方法具有操作简便、快捷、成本低、提纯效果明显等优点。提纯后的细胞核几乎没有细胞质部分污染，不仅可以应用DNA纤维制备，还可以应用于细胞核蛋白质组学研究，对于研究梨花粉管生长代谢及自交不亲和反应具有重要的意义。

公开(公告)号：CN102443564A

公开(公告)日：2012-05-09

申请号：CN201110402964.5

申请日：2011-12-07

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  高永彬 ,  王春雷 ,  周宏胜 ,  吴俊 ,  陶书田 ,  齐开杰

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种提取梨花粉管细胞核的方法，包括以下步骤：1)采集花粉：采集大蕾期花药，干燥；2)花粉培养；3)细胞核的释放：单细胞筛研磨和双细胞筛过滤释放细胞核；4)细胞核纯化：采用Percoll密度梯度离心；5)清洗Percoll。该方法不涉及酶解提取原生质体，及传统研磨过滤技术。该方法具有操作简便、快捷、成本低、提纯效果明显等优点。提纯后的细胞核几乎没有细胞质部分污染，不仅可以应用DNA纤维制备，还可以应用于细胞核蛋白质组学研究，对于研究梨花粉管生长代谢及自交不亲和反应具有重要的意义。