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公开(公告)号：CN113999305A
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202111297080.8
申请日：2021-11-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了制备获得的3株抗马链球菌兽疫亚种SzM蛋白单克隆抗体，并在不同应用场景下对其免疫反应性进行评价。使用表达纯化的SzM蛋白免疫BALB/c小鼠，基于杂交瘤细胞技术获得一批候选杂交瘤细胞株。通过ELISA、Western Blot等方法筛选得到3株产抗SzM蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。Western Blot结果表明3株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体均能够与人工表达的或细菌中粗提的野生型SzM蛋白反应，且抗体均适用于Dot Blot、IFA等免疫学检测方法。3株单克降抗体均为IgG1亚型，κ轻链的抗体，结合区域位于SzM蛋白恒定区。纯化后的抗体经过体外调理吞噬实验表明有良好的调理吞噬活性。
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公开(公告)号：CN112457398A
公开(公告)日：2021-03-09
申请号：CN202011478073.3
申请日：2020-12-15
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K16/12 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种沙门菌PagC蛋白单克隆抗体的制备方法及筛选方法，通过使用纯化的PagC蛋白免疫Balb/c小鼠，按照杂交瘤细胞制备技术，得到6株产抗PagC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞；合成属间特异的含有线性表位的氨基酸序列DRQASGSVEPEGIH(P1)和FKEHSTQDGDSFNKISSRKTGFA(P2)做为筛选抗原，得到抗原表位在线性的P1序列上的单抗细胞株J，其他5株单抗表位都不在线性的P1和P2氨基酸序列上；Western‑bloting结果表明mAb J能够与纯化的PagC蛋白、野生型的鸡白痢和鼠伤寒PagC蛋白反应而与其他肠杆菌科PagC蛋白无反应，说明筛选到的mAb J抗原表位P1在沙门菌属内保守、属间特异。本发明通过制备单克隆抗体，能够用于建立沙门菌抗体阻断ELISA检测方法，具有特异性好，灵敏度高的特点，具有广泛推广的潜力。
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公开(公告)号：CN106290918A
公开(公告)日：2017-01-04
申请号：CN201610720048.9
申请日：2016-08-24
Applicant: 南京农业大学 , 南京昌吉生物科技有限公司
IPC: G01N33/68 , G01N33/569
CPC classification number: G01N33/68 , G01N33/56911 , G01N2333/255 , G01N2800/065
Abstract: 本发明公开一种检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒，该试剂盒包括：包被有重组蛋白PagC的固相载体、酶标抗体、沙门氏菌阴性血清和阳性血清。本发明的检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒及方法，对沙门氏菌属内广泛适用，应用范围广，该试剂盒具有较高的特异性和重复性，且温度对反应板的影响较小，稳定性强，相比以多糖抗原为检测抗原的ELISA方法，本发明可最大限度降低假阳性出现率，避免肠杆菌科其他细菌抗原给检测带来的干扰。与现在临床中使用较多的玻板凝集抗原检测方法相比，本发明具有更高的灵敏度与准确性，同时极大的提高了检测的通量。
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公开(公告)号：CN112457398B
公开(公告)日：2023-01-03
申请号：CN202011478073.3
申请日：2020-12-15
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K16/12 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种沙门菌PagC蛋白的抗原表位肽，合成属间特异的含有线性表位的氨基酸序列DRQASGSVEPEGIH和FKEHSTQDGDSFNKISSRKTGFA做为筛选抗原，得到抗原表位在线性的P1序列上的单抗细胞株J，筛选到的mAb J抗原表位P1在沙门菌属内保守、属间特异。本发明通过制备单克隆抗体，能够用于建立沙门菌抗体阻断ELISA检测方法，具有特异性好，灵敏度高的特点，具有广泛推广的潜力。
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公开(公告)号：CN111440775A
公开(公告)日：2020-07-24
申请号：CN202010270668.3
申请日：2020-04-08
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N7/00 , C12N7/02 , C12Q1/18 , A61K35/76 , A61P31/04 , A01N63/40 , A01P1/00 , C12R1/92 , C12R1/42
Abstract: 本发明公开了一种杀灭沙门氏菌的噬菌体混合制剂的制备及试验方法，涉及兽医学杀菌制剂技术领域。本发明的制备方法，包括步骤：S01、温和沙门噬菌体的诱导及鉴定；S02、沙门噬菌体的纯化；S03、悬液保存；S04、制作噬菌体鸡尾酒；试验方法包括步骤：T1、制作液体培养基；T2、稀释菌液；T3、混合制备；T4、参照试验。本发明对于不同浓度的沙门菌，该制剂皆有良好的杀菌效果，能够提高其较抗生素的杀菌能力且减少细菌抗性的产生，代替抗生素的使用而应用于环境杀菌的混合制剂。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN120025956A
公开(公告)日：2025-05-23
申请号：CN202411804181.3
申请日：2024-12-10
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明适用于基因工程技术领域，以兽疫链球菌ATCC 35246株为亲本株，利用pSET4S温度敏感型自杀性基因敲除质粒，敲除其吡咯啉‑5‑羧酸还原酶基因(proC)，得到兽疫链球菌基因缺失株ATCC 35246ΔproC。此缺失株具有低毒力，以该突变株活菌大剂量免疫小鼠，可使小鼠体内抗体效价明显升高，成功建立针对性的免疫保护；ATCC 35246ΔproC制备方便，成本低，培养简单，且作为疫苗不需其他复杂的处理，洗菌后调至相应浓度即可使用。通过对小鼠进行免疫实验，结果显示，该疫苗能够有效刺激受动物机体的免疫水平，抵抗兽疫链球菌感染，且缺失株在小鼠中安全性高，免疫保护效果显著，具有作为兽疫链球菌活菌疫苗的潜力。
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公开(公告)号：CN112546210A
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN202011479886.4
申请日：2020-12-15
Applicant: 南京农业大学
IPC: A61K39/112 , A61P31/04 , G01N33/569 , G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种沙门菌基因突变株灭活疫苗的制备方法及应用，利用λ‑Red系统制备获得鸡白痢沙门菌pagC基因缺失突变株ΔPagC。取过夜培养的ΔPagC菌液，1:100接种到50ml液体LB培养基中，37℃、180rpm振荡培养至OD值约0.8；加入终浓度为0.4％的甲醛溶液，继续振荡培养16h，4℃、5000rpm离心10min后收集菌体，用无菌的PBS缓冲液洗涤重悬3次后获得原液。调整好剂量与佐剂1:1混合，充分乳化后接种动物。本发明通过制备沙门菌灭活疫苗，疫苗株接种小鼠后无不良反应，可保护小鼠应对鸡白痢沙门菌CVCC1800、肠炎沙门菌ATCC19585和鼠伤寒沙门菌CVCC542的感染。该疫苗能够能够与基于PagC蛋白的沙门菌抗体间接ELISA检测试剂盒联用，实现沙门菌人工免疫和自然感染的鉴别诊断，表现出良好的DIVA特性。
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公开(公告)号：CN118878671A
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202410892452.9
申请日：2024-07-04
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种抗兽疫链球菌SzM蛋白的猪源化单克隆抗体和应用。利用基因重组技术对一株具有良好预防或治疗兽疫链球菌感染的鼠源单克隆抗体进行猪源化改造，所获嵌合抗体将鼠源抗体恒定区替换为猪源抗体恒定区，避免了鼠源抗体在猪体内通常不能有效激活补体和Fc受体相关的免疫效应，在猪感染兽疫链球的治疗中可发挥良好效果，为临床应用中防治猪群感染兽疫链球菌提供了新型有效的生物制品。
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公开(公告)号：CN118546940A
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202410786566.5
申请日：2024-06-18
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪C反应蛋白及单克隆抗体的编码基因序列及应用。通过对序列进行优化，人工合成猪C反应蛋白基因，将合成基因插入pET‑28a载体，然后和伴侣蛋白质粒pTF16共转入BL21(DE3)宿主菌中，使猪C反应蛋白和伴侣蛋白tig共表达，以促进猪C反应蛋白的可溶性表达；通过该重组蛋白免疫并获得一株杂交瘤细胞，分泌单克隆抗体含有名为VH重链可变区及VL轻链可变区，且由互补决定区CDR1、CDR2、CDR3和框架区由组成。实验证明，经过重组表达的猪C反应蛋白具有高度特异性，通过重组蛋白制备并筛选获得产生的单克隆抗体可用于蛋白检测试剂盒。本发明的猪C反应蛋白ELISA检测试剂盒用于检测猪C反应蛋白，可有效检测猪群血清C反应蛋白浓度，检测群体炎症水平，评估猪场猪群健康水平。
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公开(公告)号：CN112587659A
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN202011478059.3
申请日：2020-12-15
Applicant: 南京农业大学
IPC: A61K39/112 , A61K47/42 , A61P31/04 , C12N1/21 , G01N33/68 , G01N33/569 , C12R1/42
Abstract: 本发明公开了一种沙门菌菌蜕疫苗的制备方法及应用，利用λ‑Red系统制备获得鸡白痢沙门菌pagC基因缺失突变株ΔPagC；取过夜培养的ΔPagC菌液，1:100接种到50ml液体LB培养基中，37℃、180rpm振荡培养至OD值约0.8；4℃，5000rpm离心10min后用无菌的PBS缓冲液洗涤3次，然后用终浓度为50μM的MAP溶液重悬菌体至OD值为0.3，21℃恒温静置16h，4℃、5000rpm离心10min收集菌体，进行灭菌效果检测和核酸残留检测；检测合格后调整剂；与佐剂1:1混合，充分乳化后接种动物。本发明疫苗株接种小鼠后无不良反应，可保护小鼠应对鸡白痢沙门菌CVCC1800、肠炎沙门菌ATCC19585和鼠伤寒沙门菌CVCC542的感染；该疫苗能够能与基于PagC蛋白的沙门菌抗体间接ELISA检测试剂盒联用，实现沙门菌人工免疫和自然感染的鉴别诊断，表现出良好的DIVA特性。
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