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公开(公告)号：CN112322551A
公开(公告)日：2021-02-05
申请号：CN202011343924.3
申请日：2020-11-25
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一株对烟叶不良成分具有多重降解效果的细菌及应用，yc10，分类命名为盖氏假单胞菌(Pseudomonas gessardii)，保藏编号为CGMCC NO.19324。本发明所公开的菌株其粗酶液可以同时降解果胶、纤维素、木质素、淀粉、蛋白质等物质。本发明的微生物菌株发酵条件经过优化之后，发酵液中酶活力均有所提高，将优化之后的发酵液均匀的喷洒在烟叶上，发酵之后的烟叶中的果胶、淀粉、纤维素、木质素和蛋白质都有所下降并且烟叶中的酮类、酯类、醇类等香气物质含量增加有所增加。
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公开(公告)号：CN117821629A
公开(公告)日：2024-04-05
申请号：CN202410168193.5
申请日：2024-02-06
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/63
Abstract: 本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种基于RPA的副溶血性弧菌试纸条检测方法及其应用。本发明首先根据副溶血性弧菌基因VP0488序列设计并筛选出的一套引物及探针组合，对引物及探针进行修饰用于产生试纸条检测所需的扩增产物，再使用试纸条对结果进行检测。实验证明本发明方法特异性强，灵敏度高，不仅为有效检测和鉴定副溶血性弧菌提供了技术手段，而且操作简便快速，适用于基层及现场检测，也能用于副溶血性弧菌的科学研究。
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公开(公告)号：CN112301139A
公开(公告)日：2021-02-02
申请号：CN202011284156.9
申请日：2020-11-17
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供一种检测大肠杆菌O157:H7的特异性靶点、引物、检测方法及应用。本发明的新型靶点，与常规检测靶点相比具有较好的特异性，降低了检测中假阳性的产生；本发明中采用Eva Green第三代饱和荧光染料，该染料具有较高的荧光信号值，提高了检测的灵敏度。同时，该染料即使在高浓度使用时，也为表现出PCR的抑制效果，大幅了检测时熔解曲线的分辨率，进而改善了本发明的检测准确性；检测方法便捷，方便观察，且无需繁琐的电泳操作，检测时间缩短在12h以内；检测过程不涉及抗体，检测成本低，可满足一般实验室的检测需求。
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公开(公告)号：CN115786540A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202111057254.3
申请日：2021-09-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于饱和荧光染料的的蜡样芽孢杆菌及其毒素的快速检测技术及试剂盒。本方法针对蜡样芽孢杆菌的cer、bceT以及hblD基因，使用PMA和qPCR结合的方法，建立了检测蜡样芽孢杆菌活菌及其毒素的多重反应体系，并创新性地使用第三代饱和荧光染料SYTO 9Green替换了传统实时荧光PCR体系中的非饱和荧光染料SYBR Green I，以提高方法的灵敏度和熔解曲线分辨率，可实现闭管检测，减少样品污染；较之一般qPCR方法，可实现活菌检测，提高检测效率；较之TaqMan探针法，无需合成荧光基团修饰探针，较为经济实惠；实现了快速、准确地鉴定出蜡样芽孢杆菌活菌及其毒素的目的。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112280878B
公开(公告)日：2023-01-31
申请号：CN202011282772.0
申请日：2020-11-17
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供一种检测副溶血性弧菌的特异性靶点、引物对、检测方法及应用。该方法本地数据库的初筛结果和在线比对的复筛结果发掘副溶血性弧菌中的可用于检测的特异性基因序列，利用发掘出的特异性靶基因结合传统靶基因构建双重实时荧光PCR方法，PCR引物对分别根据自筛靶基因VPA1585以及传统靶基因tlh设计而成，为保证检测方法的高特异性及灵敏度，采用双重实时荧光PCR方法，合理优化PCR反应体系，并创新创新性地使用第三代饱和荧光染料SYTO Green 9替换了传统实时荧光PCR体系中的非饱和荧光染料SYBR Green，可以快速、准确地鉴定出副溶血性弧菌。
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公开(公告)号：CN112322551B
公开(公告)日：2022-02-15
申请号：CN202011343924.3
申请日：2020-11-25
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一株对烟叶不良成分具有多重降解效果的细菌及应用，yc10，分类命名为盖氏假单胞菌(Pseudomonas gessardii)，保藏编号为CGMCC NO.19324。本发明所公开的菌株其粗酶液可以同时降解果胶、纤维素、木质素、淀粉、蛋白质等物质。本发明的微生物菌株发酵条件经过优化之后，发酵液中酶活力均有所提高，将优化之后的发酵液均匀的喷洒在烟叶上，发酵之后的烟叶中的果胶、淀粉、纤维素、木质素和蛋白质都有所下降并且烟叶中的酮类、酯类、醇类等香气物质含量增加有所增加。
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公开(公告)号：CN112301139B
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202011284156.9
申请日：2020-11-17
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供一种检测大肠杆菌O157:H7的特异性靶点、引物、检测方法及应用。本发明的新型靶点，与常规检测靶点相比具有较好的特异性，降低了检测中假阳性的产生；本发明中采用Eva Green第三代饱和荧光染料，该染料具有较高的荧光信号值，提高了检测的灵敏度。同时，该染料即使在高浓度使用时，也为表现出PCR的抑制效果，大幅了检测时熔解曲线的分辨率，进而改善了本发明的检测准确性；检测方法便捷，方便观察，且无需繁琐的电泳操作，检测时间缩短在12h以内；检测过程不涉及抗体，检测成本低，可满足一般实验室的检测需求。
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公开(公告)号：CN112280878A
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN202011282772.0
申请日：2020-11-17
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供一种检测副溶血性弧菌的特异性靶点、引物对、检测方法及应用。该方法本地数据库的初筛结果和在线比对的复筛结果发掘副溶血性弧菌中的可用于检测的特异性基因序列，利用发掘出的特异性靶基因结合传统靶基因构建双重实时荧光PCR方法，PCR引物对分别根据自筛靶基因VPA1585以及传统靶基因tlh设计而成，为保证检测方法的高特异性及灵敏度，采用双重实时荧光PCR方法，合理优化PCR反应体系，并创新创新性地使用第三代饱和荧光染料SYTO Green 9替换了传统实时荧光PCR体系中的非饱和荧光染料SYBR Green，可以快速、准确地鉴定出副溶血性弧菌。
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公开(公告)号：CN115976081A
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202211527707.9
申请日：2022-12-01
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种副溶血性弧菌和大肠杆菌O157：H7标准质粒、制备方法及其应用。本发明的副溶血性弧菌标准质粒样品采用副溶血性弧菌tlh、trh、toxR、gyrB、groEL基因以及自筛高特异靶基因VPA1585，使用重叠延伸PCR将特异性扩增片段串联并克隆至pUC19质粒形成；大肠杆菌O157：H7标准质粒样品采用大肠杆菌O157：H7 rfbE、fliC、stx1、stx2以及自筛高特异靶基因ECS2840，使用重叠延伸PCR将特异性扩增片段串联并克隆至pUC19质粒形成。本发明制备的标准质粒序列来源清晰、纯度高且应用能力良好，可应用于食源性致病菌核酸检测，为副溶血性弧菌、大肠杆菌O157：H7检测获得准确、可靠、具有可比性的检测结果提供保障。
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