公开(公告)号：CN101906159B

公开(公告)日：2012-03-21

申请号：CN201010204412.9

申请日：2010-06-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张海彬 ,  张爱华 ,  王希春 ,  何成华 ,  王莹

IPC: C07K16/14 ,  C12N5/20 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及杂交瘤细胞株D6D的研制，属于生物技术领域。用BSA与OTA偶联后的OTA-BSA免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合，用HAT培养基进行选择性培养。用KLH与OTA偶联后的完全抗原OTA-KLH作为ELISA的包被抗原，用间接ELISA方法，对杂交瘤细胞培养上清中的抗体含量进行检测，筛选获得稳定分泌抗OTA单克隆抗体的杂交瘤细胞株D6D，测得D6D腹水ELISA效价为1∶3200，经鉴定该单克隆抗体可与OTA特异性结合，纯化的单克隆抗体的SDS-PAGE电泳图呈现两条蛋白条带分别约是50KD、25KD，与抗体蛋白变性成两条轻链重链的分子量大小吻合，再次表明获得抗OTA特异性抗体的事实，该单克隆抗体的亚型为IgG2b，轻链为κ链。本发明提供的特异性单克隆抗体可用于OTA的研究和OTA免疫学检测方法的建立。

公开(公告)号：CN101899111A

公开(公告)日：2010-12-01

申请号：CN201010204427.5

申请日：2010-06-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张海彬 ,  郑浩 ,  王莹 ,  何成华 ,  王希春

IPC: C07K16/14 ,  C12N5/20 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及杂交瘤细胞株F3的研制，属于生物技术领域。取Sp2/0骨髓瘤细胞与用牛血清白蛋白(BSA)与伏马菌素B1(FB1)偶联后的偶联蛋白(FB1-BSA)免疫BALB/c小鼠的脾细胞进行细胞融合，用HAT培养基进行选择性培养后，用卵清白蛋白(OVA)与伏马菌素B1偶联后的偶联蛋白(FB1-OVA)进行间接ELISA筛选，对细胞培养上清进行检测、筛选获得稳定分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株F3，测得F3腹水ELISA效价为1∶51200，经鉴定该单克隆抗体可与FB1特异性结合，F3细胞株的染色体数目为101条，该单克隆抗体的类别为IgG1，轻链类型为κ。本发明提供的FB1单克隆抗体特异性强，制备方法简单，可用于FB1的研究和FB1免疫学检测方法的建立。

公开(公告)号：CN101906159A

公开(公告)日：2010-12-08

申请号：CN201010204412.9

申请日：2010-06-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张海彬 ,  张爱华 ,  王希春 ,  何成华 ,  王莹

IPC: C07K16/14 ,  C12N5/20 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及杂交瘤细胞株D6D的研制，属于生物技术领域。用BSA与OTA偶联后的OTA-BSA免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合，用HAT培养基进行选择性培养。用KLH与OTA偶联后的完全抗原OTA-KLH作为ELISA的包被抗原，用间接ELISA方法，对杂交瘤细胞培养上清中的抗体含量进行检测，筛选获得稳定分泌抗OTA单克隆抗体的杂交瘤细胞株D6D，测得D6D腹水ELISA效价为1∶3200，经鉴定该单克隆抗体可与OTA特异性结合，纯化的单克隆抗体的SDS-PAGE电泳图呈现两条蛋白条带分别约是50KD、25KD，与抗体蛋白变性成两条轻链重链的分子量大小吻合，再次表明获得抗OTA特异性抗体的事实，该单克隆抗体的亚型为IgG2b，轻链为κ链。本发明提供的特异性单克隆抗体可用于OTA的研究和OTA免疫学检测方法的建立。