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公开(公告)号：CN119242450A
公开(公告)日：2025-01-03
申请号：CN202410810093.8
申请日：2024-06-21
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N1/14 , C12N13/00 , C12N15/04 , C12N1/02 , C12Q1/6895 , C12Q1/6869 , C12Q1/04 , C12R1/885
Abstract: 本发明公开了一种无性繁殖类丝状真菌新功能基因的挖掘方法及其应用，涉及应用微生物技术领域，保藏编号：CGMCC No.12166；保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心；保藏日期：2016年4月11日。本发明公开了一种无性繁殖类丝状真菌新功能基因的挖掘方法：S1、构建脲苷合成缺陷型但具有潮霉素抗性的木霉菌株A；S2、获取随机突变株B；S3、通过原生质体融合方法构建暂时性拟似“二倍体”；S4、通过核内的两套染色体通过同源重组进行随机突变子染色体基因随机回补，并通过表型变化筛选获得表型回补突变子；S5、利用重测序技术确定回补的关键突变位点并通过基因编辑方法反向验证基因功能。本发明方法给研究无性繁殖类丝状真菌的功能基因提供了新的方法。
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公开(公告)号：CN107084867B
公开(公告)日：2018-05-25
申请号：CN201710261618.7
申请日：2017-04-20
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N1/28
Abstract: 本发明公开了一种丝状真菌固体发酵产物总蛋白的提取方法。本方法的技术核心是结合玻璃珠机械破壁与细胞破碎缓冲液(SI)的方法，来破坏丝状真菌厚实坚韧的细胞壁并释放出胞内总蛋白，并在提取缓冲液(SII)和蛋白酶抑制剂的保护下提取到高质量的木霉固体发酵产物总蛋白。本发明采用了一种简单易行的方法，克服了丝状真菌细胞壁厚实坚韧、胞内蛋白难以释放，固体发酵物中高有机质和腐殖酸类物质的干扰，结合半透膜透析法可以直接从木霉固体发酵产物中提取到高质量的总蛋白，为固体发酵过程中丝状真菌蛋白质组学的研究提供技术保障。
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公开(公告)号：CN107084867A
公开(公告)日：2017-08-22
申请号：CN201710261618.7
申请日：2017-04-20
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N1/28
CPC classification number: G01N1/28
Abstract: 本发明公开了一种丝状真菌固体发酵产物总蛋白的提取方法。本方法的技术核心是结合玻璃珠机械破壁与细胞破碎缓冲液(SI)的方法，来破坏丝状真菌厚实坚韧的细胞壁并释放出胞内总蛋白，并在提取缓冲液(SII)和蛋白酶抑制剂的保护下提取到高质量的木霉固体发酵产物总蛋白。本发明采用了一种简单易行的方法，克服了丝状真菌细胞壁厚实坚韧、胞内蛋白难以释放，固体发酵物中高有机质和腐殖酸类物质的干扰，结合半透膜透析法可以直接从木霉固体发酵产物中提取到高质量的总蛋白，为固体发酵过程中丝状真菌蛋白质组学的研究提供技术保障。
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公开(公告)号：CN115197957B
公开(公告)日：2023-10-10
申请号：CN202210528710.6
申请日：2022-05-16
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种提高贵州木霉NJAU 4742在逆境下分解农作物秸秆的基因片段及其应用。一种贵州木霉NJAU 4742中ADP核糖焦磷酸酶基因Tradp，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。含有ADP核糖焦磷酸酶基因Tradp的过表达片段。本发明最新发现的贵州木霉NJAU4742中ADP核糖焦磷酸酶基因Tradp在热胁迫下农作物秸秆分解过程中具有重要的作用，基因过表达后显著提高热胁迫下贵州木霉NJAU 4742的生物量及木质纤维素酶的分泌。本发明为新型木霉生物有机肥的研制、生态农业的发展提供了理论基础和技术保障。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116286403A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202211121153.2
申请日：2022-09-15
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种丝状真菌氧化还原指示传感器及其构建方法和应用。本发明所涉及的传感器，以avGFP为原型，通过定点突变氨基酸位点并在avGFP的149和202位引入一对半胱氨酸最终形成相应序列；以哈茨木霉NJAU 4742的基因组DNA为模板，克隆长度为1308 bp的U3基因片段，基因合成潮霉素B抗性表达片段，以哈茨木霉NJAU 4742的基因组DNA为模板，克隆长度为532bp的U3基因上游同源臂，克隆长度为1663bp的强启动子片段，以pUC57质粒为模板扩增的氧化还原指示传感器功能性片段以及长度为1185bp的U3基因下游同源臂，并将6个片段利用融合PCR技术进行融合，再通过转化的方式最终形成氧化还原指示荧光菌株。本发明的传感器，将为实现丝状真菌胞内氧化还原状态的可视化操作提供理论和应用基础。
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公开(公告)号：CN116064637A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211121243.1
申请日：2022-09-15
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种适用于丝状真菌胞内葡萄糖含量原位实时监测感受器及其构建方法和应用。本发明的一种适用于丝状真菌胞内葡萄糖含量原位实时监测感受器的编码基因，其核苷酸序列选自如下（1）或（2）：（1）如SEQ ID NO.1所示；（2）与SEQ ID NO.1所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同源性的核苷酸序列。本发明中所涉及的胞内葡萄糖含量原位实时监测感受器，将为提高丝状真菌胞内葡萄糖含量的精准监测和调控提供坚实的理论和应用基础。
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公开(公告)号：CN115960254A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202211121257.3
申请日：2022-09-15
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种适用于丝状真菌胞内氢离子浓度原位监测的传感器及其构建方法和应用。本发明的传感器，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。构建时，以质粒pME pHluorin2为模板，扩增获得氢离子浓度敏感基因片段；以质粒pcDNA为模板，扩增HygB和Mcherry片段；以哈茨木霉NJAU 4742的基因组为模板，扩增基因启动子、ura3功能基因片段、ura3上游500bp片段、ura3上游1200bp片段；利用重叠延伸PCR方法将这些片段以U3‑hygB‑U3 up‑promotor‑M‑pHluorin2‑U3 down的顺序连接，形成含有潮霉素抗性的Mcherry与氢离子浓度传感器双荧光示踪工作片段。本发明的传感器，将为提高丝状真菌胞内氢离子浓度的精准监测和调控提供充实的理论和应用基础。
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公开(公告)号：CN115197957A
公开(公告)日：2022-10-18
申请号：CN202210528710.6
申请日：2022-05-16
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种提高贵州木霉NJAU 4742在逆境下分解农作物秸秆的基因片段及其应用。一种贵州木霉NJAU 4742中ADP核糖焦磷酸酶基因Tradp，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。含有ADP核糖焦磷酸酶基因Tradp的过表达片段。本发明最新发现的贵州木霉NJAU4742中ADP核糖焦磷酸酶基因Tradp在热胁迫下农作物秸秆分解过程中具有重要的作用，基因过表达后显著提高热胁迫下贵州木霉NJAU 4742的生物量及木质纤维素酶的分泌。本发明为新型木霉生物有机肥的研制、生态农业的发展提供了理论基础和技术保障。
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公开(公告)号：CN115029361A
公开(公告)日：2022-09-09
申请号：CN202210544670.4
申请日：2022-05-19
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种原位监测胞内ATP含量传感器的构建方法及其应用。一种能够原位监测贵州木霉NJAU 4742胞内ATP含量的传感器，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所涉及的ATP传感器，主要包括青色荧光蛋白片段(CFP)和黄色荧光蛋白片段(YFP)以及ATP识别基团；以质粒pcDNA为模板，扩增含有HygB、基因启动子、终止子和线性化表达载体片段；利用一步克隆法将ATP传感器片段与线性化表达载体连接，形成具有潮霉素抗性的ATP荧光示踪工作原件质粒。本发明中ATP传感器，将为提高丝状真菌胞内ATP含量的精准监测和调控提供充实的理论和应用基础。
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