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公开(公告)号：CN113151325B
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN202110419550.7
申请日：2021-04-19
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种β‑葡萄糖苷酶基因bgI及其编码蛋白与应用。本发明的β‑葡萄糖苷酶基因bgI，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；该基因编码的蛋白为β‑葡萄糖苷酶BGI。从BGI的酶促反应动力学分析可得其水解p‑NPG的最大反应速率达0.648μM·min‑1。酶学结果分析表明：在pH4‑6时，BGI水解p‑NPG每分钟可产生的还原糖含量最高值高达0.058μM·mL‑1，属于酸性内切纤维素酶；温度达100℃时，BGI水解p‑NPG每分钟产生的还原糖含量可达0.023μM·mL‑1，在高温下仍有较强的活性。本发明为农业废弃物的资源化利用、生态农业的发展提供了理论基础和技术保障。
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公开(公告)号：CN116064637A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211121243.1
申请日：2022-09-15
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种适用于丝状真菌胞内葡萄糖含量原位实时监测感受器及其构建方法和应用。本发明的一种适用于丝状真菌胞内葡萄糖含量原位实时监测感受器的编码基因，其核苷酸序列选自如下（1）或（2）：（1）如SEQ ID NO.1所示；（2）与SEQ ID NO.1所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同源性的核苷酸序列。本发明中所涉及的胞内葡萄糖含量原位实时监测感受器，将为提高丝状真菌胞内葡萄糖含量的精准监测和调控提供坚实的理论和应用基础。
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公开(公告)号：CN115960254A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202211121257.3
申请日：2022-09-15
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种适用于丝状真菌胞内氢离子浓度原位监测的传感器及其构建方法和应用。本发明的传感器，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。构建时，以质粒pME pHluorin2为模板，扩增获得氢离子浓度敏感基因片段；以质粒pcDNA为模板，扩增HygB和Mcherry片段；以哈茨木霉NJAU 4742的基因组为模板，扩增基因启动子、ura3功能基因片段、ura3上游500bp片段、ura3上游1200bp片段；利用重叠延伸PCR方法将这些片段以U3‑hygB‑U3 up‑promotor‑M‑pHluorin2‑U3 down的顺序连接，形成含有潮霉素抗性的Mcherry与氢离子浓度传感器双荧光示踪工作片段。本发明的传感器，将为提高丝状真菌胞内氢离子浓度的精准监测和调控提供充实的理论和应用基础。
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公开(公告)号：CN113151325A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110419550.7
申请日：2021-04-19
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种β‑葡萄糖苷酶基因bgI及其编码蛋白与应用。本发明的β‑葡萄糖苷酶基因bgI，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；该基因编码的蛋白为β‑葡萄糖苷酶BGI。从BGI的酶促反应动力学分析可得其水解p‑NPG的最大反应速率达0.648μM·min‑1。酶学结果分析表明：在pH4‑6时，BGI水解p‑NPG每分钟可产生的还原糖含量最高值高达0.058μM·mL‑1，属于酸性内切纤维素酶；温度达100℃时，BGI水解p‑NPG每分钟产生的还原糖含量可达0.023μM·mL‑1，在高温下仍有较强的活性。本发明为农业废弃物的资源化利用、生态农业的发展提供了理论基础和技术保障。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116218878A
公开(公告)日：2023-06-06
申请号：CN202211622044.9
申请日：2022-12-16
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一种显著促进膨胀蛋白TgS可溶表达的方法及其应用。本发明利用助溶标签蛋白，并通过改变和优化蛋白表达过程中的发酵条件，从而提高膨胀蛋白TgS的可溶表达。基于前期研究结果和当前可溶蛋白利用优化的需求，发现在大肠杆菌体系的蛋白表达过程中，TRX标签蛋白、低温(12℃)，通气量为0.5(V/V·min‑1)，添加0.02g·L‑1ZnSO4和0.1％丙三醇条件下可以实现膨胀蛋白TgS可溶表达。本发明从包涵体生成特性来组合优化蛋白发酵过程，实现了膨胀蛋白TgS异源表达时的可溶性高效表达，显著增加了其生物活性，同时降低了包涵体变复性成本。
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公开(公告)号：CN113151326B
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN202110419551.1
申请日：2021-04-19
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种内切纤维素酶基因egI及其编码的蛋白与应用。本发明的内切纤维素酶基因egI，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示所示；该基因编码的蛋白即为内切纤维素酶EGI。从EGI的酶促反应动力学分析可得其水解CMC的最大反应速率达22.2 mg·min‑1。酶学结果分析表明：在pH 3‑4时，EGI水解CMC每分钟可产生的还原糖含量最高值高达21.4 mg·mL‑1，属于酸性内切纤维素酶；温度达100℃时，EGI水解CMC每分钟产生的还原糖含量可达12.4 mg·mL‑1，在高温下仍有较强的活性。本发明为农业废弃物的资源化利用、生态农业的发展提供了理论基础和技术保障。
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公开(公告)号：CN114181958A
公开(公告)日：2022-03-15
申请号：CN202110775430.0
申请日：2021-07-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种α‑淀粉酶基因amy1及其编码的蛋白与应用。首先以堆肥样品为原料提取总RNA，再通过反转录获取α‑淀粉酶基因amy1的cDNA；以cDNA为模板，利用PCR扩增法获得的amy1基因的完整序列；接着采用双酶切和酶连方法，将完整的amy1基因插入到pPICZαA表达载体上，获得重组表达质粒pPICZαA‑amy1；然后采用电击转化法将重组表达质粒pPICZαA‑amy1转化到毕赤酵母感受态中，筛选高效的工程菌转化子；最后工程菌经过液体发酵培养基诱导培养后，分泌α‑淀粉酶AMY1。酶学结果分析表明：温度在40℃时，AMY1水解可溶性淀粉每分钟产生的还原糖含量为0.55μg/mL，在pH6‑8时，AMY1水解可溶性淀粉每分钟可产生的还原糖含量最高值为0.78μg/mL。本发明为农业废弃物的资源化利用、生态农业的发展提供了理论基础和技术保障。
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公开(公告)号：CN113151326A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110419551.1
申请日：2021-04-19
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种内切纤维素酶基因egI及其编码的蛋白与应用。本发明的内切纤维素酶基因egI，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示所示；该基因编码的蛋白即为内切纤维素酶EGI。从EGI的酶促反应动力学分析可得其水解CMC的最大反应速率达22.2 mg·min‑1。酶学结果分析表明：在pH 3‑4时，EGI水解CMC每分钟可产生的还原糖含量最高值高达21.4 mg·mL‑1，属于酸性内切纤维素酶；温度达100℃时，EGI水解CMC每分钟产生的还原糖含量可达12.4 mg·mL‑1，在高温下仍有较强的活性。本发明为农业废弃物的资源化利用、生态农业的发展提供了理论基础和技术保障。
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公开(公告)号：CN114181958B
公开(公告)日：2023-06-09
申请号：CN202110775430.0
申请日：2021-07-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种α‑淀粉酶基因amy1及其编码的蛋白与应用。首先以堆肥样品为原料提取总RNA，再通过反转录获取α‑淀粉酶基因amy1的cDNA；以cDNA为模板，利用PCR扩增法获得的amy1基因的完整序列；接着采用双酶切和酶连方法，将完整的amy1基因插入到pPICZαA表达载体上，获得重组表达质粒pPICZαA‑amy1；然后采用电击转化法将重组表达质粒pPICZαA‑amy1转化到毕赤酵母感受态中，筛选高效的工程菌转化子；最后工程菌经过液体发酵培养基诱导培养后，分泌α‑淀粉酶AMY1。酶学结果分析表明：温度在40℃时，AMY1水解可溶性淀粉每分钟产生的还原糖含量为0.55μg/mL，在pH6‑8时，AMY1水解可溶性淀粉每分钟可产生的还原糖含量最高值为0.78μg/mL。本发明为农业废弃物的资源化利用、生态农业的发展提供了理论基础和技术保障。
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