一种基于CRISPR/Cas9系统敲除猪细胞Y染色体的方法

    公开(公告)号:CN116064541B

    公开(公告)日:2025-03-18

    申请号:CN202211294282.1

    申请日:2022-10-21

    Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR/Cas9系统敲除猪细胞Y染色体的方法,属于生物技术领域,该方法主要包括:(1)根据生物信息学找出位于Y染色体上的特异靶向重复序列并设计相应的gRNA;(2)进行CRISPR/Cas9载体的制备;(3)将构建好的载体电转入公猪胎儿成纤维细胞中,并通过q‑PCR验证其在细胞水平的靶基因表达水平下降情况;(4)选择效率较高的gRNA电转,进行流式分选稀释获取单克隆,并对单克隆进行PCR及核型分析验证。本发明在猪的特定染色体寻找能够被特异sgRNA识别的重复序列,为特定染色体及其携带基因功能的研究提供了一种新的工具,同时也为实现大型家畜性别控制提供一种新的技术方案。

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