公开(公告)号：CN116064541B

公开(公告)日：2025-03-18

申请号：CN202211294282.1

申请日：2022-10-21

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 吴珍芳 ,  孟繁明 ,  杨化强 ,  霍梦飞 ,  郑恩琴 ,  杨杰

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR/Cas9系统敲除猪细胞Y染色体的方法，属于生物技术领域，该方法主要包括：(1)根据生物信息学找出位于Y染色体上的特异靶向重复序列并设计相应的gRNA；(2)进行CRISPR/Cas9载体的制备；(3)将构建好的载体电转入公猪胎儿成纤维细胞中，并通过q‑PCR验证其在细胞水平的靶基因表达水平下降情况；(4)选择效率较高的gRNA电转，进行流式分选稀释获取单克隆，并对单克隆进行PCR及核型分析验证。本发明在猪的特定染色体寻找能够被特异sgRNA识别的重复序列，为特定染色体及其携带基因功能的研究提供了一种新的工具，同时也为实现大型家畜性别控制提供一种新的技术方案。

公开(公告)号：CN116064541A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202211294282.1

申请日：2022-10-21

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 吴珍芳 ,  孟繁明 ,  杨化强 ,  霍梦飞 ,  郑恩琴 ,  杨杰

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR/Cas9系统敲除猪细胞Y染色体的方法，属于生物技术领域，该方法主要包括：(1)根据生物信息学找出位于Y染色体上的特异靶向重复序列并设计相应的gRNA；(2)进行CRISPR/Cas9载体的制备；(3)将构建好的载体电转入公猪胎儿成纤维细胞中，并通过q‑PCR验证其在细胞水平的靶基因表达水平下降情况；(4)选择效率较高的gRNA电转，进行流式分选稀释获取单克隆，并对单克隆进行PCR及核型分析验证。本发明在猪的特定染色体寻找能够被特异sgRNA识别的重复序列，为特定染色体及其携带基因功能的研究提供了一种新的工具，同时也为实现大型家畜性别控制提供一种新的技术方案。

公开(公告)号：CN104946581A

公开(公告)日：2015-09-30

申请号：CN201510210334.6

申请日：2015-04-28

Applicant: 广东温氏食品集团股份有限公司 ,  华南农业大学

Inventor： 吴珍芳 ,  贺晓燕 ,  孟繁明 ,  李紫聪 ,  石俊松 ,  周荣 ,  张献伟

IPC: C12N5/0735

Abstract: 本发明公开了一种培养猪滋养层干细胞的专用培养基及方法，该专用培养基成分包括bFGF、activin A、Y27632、Knockout SR和β-巯基乙醇 。培养方法是将干细胞培养器皿预先用细胞外基质包被；然后将猪囊胚用蛋白酶消化去除透明带，转入干细胞培养器皿中，添加本发明的专用培养基；培养至形成总细胞数为1000~2000个的滋养层干细胞克隆团时，消化成单细胞，转入新的经细胞外基质包被的培养器皿进行细胞的传代培养。本发明的专用培养基成分确定，使用安全性高，避免异源细胞的污染。培养方法简单高效，对猪滋养层干细胞培养具有克隆形成率高、细胞凋亡率低、增殖传代能力强和安全稳定的优点。

公开(公告)号：CN104946581B

公开(公告)日：2017-10-13

申请号：CN201510210334.6

申请日：2015-04-28

Applicant: 广东温氏食品集团股份有限公司 ,  华南农业大学

Inventor： 吴珍芳 ,  贺晓燕 ,  孟繁明 ,  李紫聪 ,  石俊松 ,  周荣 ,  张献伟

IPC: C12N5/0735

Abstract: 本发明公开了一种培养猪滋养层干细胞的专用培养基及方法，该专用培养基成分包括bFGF、activin A、Y27632、Knockout SR和β‑巯基乙醇。培养方法是将干细胞培养器皿预先用细胞外基质包被；然后将猪囊胚用蛋白酶消化去除透明带，转入干细胞培养器皿中，添加本发明的专用培养基；培养至形成总细胞数为1000~2000个的滋养层干细胞克隆团时，消化成单细胞，转入新的经细胞外基质包被的培养器皿进行细胞的传代培养。本发明的专用培养基成分确定，使用安全性高，避免异源细胞的污染。培养方法简单高效，对猪滋养层干细胞培养具有克隆形成率高、细胞凋亡率低、增殖传代能力强和安全稳定的优点。