公开(公告)号：CN113736900B

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202111007800.2

申请日：2021-08-30

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 胡宇飞 ,  陈晓静 ,  黄吉雷 ,  庄楚雄

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6851

Abstract: 本发明公开了一种筛选单拷贝T‑DNA转基因植株的方法，通过植物基因组中一对参考扩增片段(R1，R2)和T‑DNA(T)扩增的Ct值在双拷贝转基因植株中构成夹心关系(R1‑T‑R2)；双拷贝T‑DNA转基因植株的Ct值介于R1和R2间，形成三明治式的R1‑T‑R2的夹心Ct关系。单拷贝相对双拷贝植株，其T‑DNA扩增Ct值增大约1，其Ct值移出夹心关系，而产生R1‑R2‑T的Ct模式；通过比较不同Ct值关系找出单拷贝T‑DNA转基因植株。本发明不需要计算ΔCt，ΔΔCt以及2‑ΔΔCt，通过直接展示两对参考序列(R1，R2)和T‑DNA的扩增Ct值的关系，判断转基因拷贝数的变化，方法直接、简单且可靠。

公开(公告)号：CN113736900A

公开(公告)日：2021-12-03

申请号：CN202111007800.2

申请日：2021-08-30

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 胡宇飞 ,  陈晓静 ,  黄吉雷 ,  庄楚雄

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6851

Abstract: 本发明公开了一种筛选单拷贝T‑DNA转基因植株的方法，通过植物基因组中一对参考扩增片段(R1，R2)和T‑DNA(T)扩增的Ct值在双拷贝转基因植株中构成夹心关系(R1‑T‑R2)；双拷贝T‑DNA转基因植株的Ct值介于R1和R2间，形成三明治式的R1‑T‑R2的夹心Ct关系。单拷贝相对双拷贝植株，其T‑DNA扩增Ct值增大约1，其Ct值移出夹心关系，而产生R1‑R2‑T的Ct模式；通过比较不同Ct值关系找出单拷贝T‑DNA转基因植株。本发明不需要计算ΔCt，ΔΔCt以及2‑ΔΔCt，通过直接展示两对参考序列(R1，R2)和T‑DNA的扩增Ct值的关系，判断转基因拷贝数的变化，方法直接、简单且可靠。

公开(公告)号：CN113552335B

公开(公告)日：2023-06-20

申请号：CN202010446599.7

申请日：2020-05-25

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 李娜 ,  杨富娴 ,  黄吉雷 ,  冯耀宇 ,  郭亚琼

IPC: G01N33/532 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  G01N23/04 ,  G01N23/20

Abstract: 本发明公开了一种用于定位隐孢子虫胞内不同寄生时期特异表达蛋白的免疫电镜样品的制备方法。本发明将感染有隐孢子虫卵囊的HCT‑8细胞样品在戊二醛‑多聚甲醛混合固定液中固定，然后经低熔点琼脂糖预包埋，乙醇梯度脱水，LR‑White树脂渗透，包埋，聚合，将样品包埋块超薄切片后进行免疫金标记和重金属染色，即可制得电镜观察用的隐孢子虫样本。通过本发明方法，制备的样品的反应免疫原性良好，隐孢子虫形态良好，结构完整，隐孢子虫的纳虫空泡边缘光滑，可以看清胞内时期的隐孢子虫内部结构的样品，能够为研究胞内寄生时期的隐孢子虫的形态及虫体蛋白的定位，有利于研究隐孢子虫的入侵机制、代谢通路、致病机制，为开发疫苗提供可能。

公开(公告)号：CN113552335A

公开(公告)日：2021-10-26

申请号：CN202010446599.7

申请日：2020-05-25

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 李娜 ,  杨富娴 ,  黄吉雷 ,  冯耀宇 ,  郭亚琼

IPC: G01N33/532 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  G01N23/04 ,  G01N23/20

Abstract: 本发明公开了一种用于定位隐孢子虫胞内不同寄生时期特异表达蛋白的免疫电镜样品的制备方法。本发明将感染有隐孢子虫卵囊的HCT‑8细胞样品在戊二醛‑多聚甲醛混合固定液中固定，然后经低熔点琼脂糖预包埋，乙醇梯度脱水，LR‑White树脂渗透，包埋，聚合，将样品包埋块超薄切片后进行免疫金标记和重金属染色，即可制得电镜观察用的隐孢子虫样本。通过本发明方法，制备的样品的反应免疫原性良好，隐孢子虫形态良好，结构完整，隐孢子虫的纳虫空泡边缘光滑，可以看清胞内时期的隐孢子虫内部结构的样品，能够为研究胞内寄生时期的隐孢子虫的形态及虫体蛋白的定位，有利于研究隐孢子虫的入侵机制、代谢通路、致病机制，为开发疫苗提供可能。

公开(公告)号：CN117191835A

公开(公告)日：2023-12-08

申请号：CN202310937936.6

申请日：2023-07-28

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 黄吉雷 ,  刘传荷 ,  邬晓仙 ,  林志超

IPC: G01N23/20008 ,  G01N1/28 ,  G01N1/31 ,  G01N23/04

Abstract: 本发明公开了一种植物茎秆细胞壁超微结构的透射电镜制样方法，包括依次对植物茎秆样品进行前固定，漂洗，后固定，脱水，渗透，包埋，聚合，切片，收集；所述切片速度为3～5mm/s、切片厚度为150～200nm。本发明通过提高超薄切片速度以及切片厚度，可获得细胞壁褶皱显著减少甚至无褶皱的植物茎秆超薄切片，解决了现有植物茎秆样本超薄切片细胞壁上褶皱多，影响对细胞壁超微结构观察的问题。