一种丁香假单胞菌中的重组系统及应用

    公开(公告)号:CN113943748B

    公开(公告)日:2023-06-16

    申请号:CN202111306614.9

    申请日:2021-11-05

    Abstract: 本发明公开了一种丁香假单胞菌中的重组系统及应用,涉及基因工程技术领域;该重组系统的核苷酸序列为如SEQ ID No.37所示序列,其中该重组系统携带庆大霉素基因、阿拉伯糖调控基因和重组酶基因amp‑araC‑red、广宿主复制子pBBR1和蔗糖敏感负筛选基因sacB。该重组系统可以应用于丁香假单胞菌的基因重组中,能介导Psyr_1621的全基因敲除和Psyr_3467的5’端部分敲除,该重组系统不仅携带由阿拉伯糖诱导的λRed的重组酶蛋白,并且可以在蔗糖的筛选压力下将质粒丢失。

    一种用于红球菌基因敲除的重组系统及其应用

    公开(公告)号:CN115786229A

    公开(公告)日:2023-03-14

    申请号:CN202211697472.8

    申请日:2022-12-28

    Abstract: 本发明属于细胞工程技术领域,具体涉及一种用于红球菌基因敲除的重组系统及其应用。包括:Che9c60&61重组酶质粒、Flp重组酶和游离双链DNA敲除盒片段;游离双链DNA敲除盒片段包括:目的基因上下游同源臂序列及在其间插入包含抗性基因的两个同向FRT序列;Flp重组酶质粒的基因序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示。该用于红球菌基因敲除的重组系统可以有效对红球菌进行无痕敲除,庆大霉素抗性丢失效率达到了100%和78.7%;而且本发明基于FRT位点特异性重组酶Flpw方法可有效实现红球菌Rhodococcus ruber R1的高效无痕敲除,为下一轮基因编辑(多基因敲除)回收抗性基因。

    一种丁香假单胞菌中的重组系统及应用

    公开(公告)号:CN113943748A

    公开(公告)日:2022-01-18

    申请号:CN202111306614.9

    申请日:2021-11-05

    Abstract: 本发明公开了一种丁香假单胞菌中的重组系统及应用,涉及基因工程技术领域;该重组系统的核苷酸序列为如SEQ ID No.37所示序列,其中该重组系统携带庆大霉素基因、阿拉伯糖调控基因和重组酶基因amp‑araC‑red、广宿主复制子pBBR1和蔗糖敏感负筛选基因sacB。该重组系统可以应用于丁香假单胞菌的基因重组中,能介导Psyr_1621的全基因敲除和Psyr_3467的5’端部分敲除,该重组系统不仅携带由阿拉伯糖诱导的λRed的重组酶蛋白,并且可以在蔗糖的筛选压力下将质粒丢失。

    一种检测革兰氏阴性细菌启动子转录活性的报告基因质粒载体、质粒及应用

    公开(公告)号:CN118308395A

    公开(公告)日:2024-07-09

    申请号:CN202410466807.8

    申请日:2024-04-18

    Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域,具体涉及一种检测革兰氏阴性菌启动子转录活性的报告基因质粒载体、质粒及应用;本发明报告基因质粒载体包括pFA‑Gm和/或pFA‑Kan质粒,pFA‑Gm质粒包括复制子元件、mob元件以及筛选标记庆大霉素抗性基因,pFA‑Gm质粒的多克隆位点区域两侧分别含有大肠杆菌编码核糖体RNA的rrnB基因的终止区T1和T2,pFA‑Gm质粒的多克隆位点的3′端方向含有1×Flag标签;报告基因质粒为将报告基因片段连接到报告基因质粒载体上而得到;本发明通过报告基因质粒实现对革兰氏阴性细菌中基因启动子转录活性的评估,较实时荧光定量PCR技术的成本以及操作难度更低。

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