公开(公告)号：CN115786229B

公开(公告)日：2024-05-03

申请号：CN202211697472.8

申请日：2022-12-28

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 马金成 ,  温宇明 ,  游晓琳 ,  王海洪 ,  张文彬 ,  胡喆 ,  黄云超

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  C12N15/31 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明属于细胞工程技术领域，具体涉及一种用于红球菌基因敲除的重组系统及其应用。包括：Che9c60&61重组酶质粒、Flp重组酶和游离双链DNA敲除盒片段；游离双链DNA敲除盒片段包括：目的基因上下游同源臂序列及在其间插入包含抗性基因的两个同向FRT序列；Flp重组酶质粒的基因序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示。该用于红球菌基因敲除的重组系统可以有效对红球菌进行无痕敲除，庆大霉素抗性丢失效率达到了100％和78.7％；而且本发明基于FRT位点特异性重组酶Flpw方法可有效实现红球菌Rhodococcus ruber R1的高效无痕敲除，为下一轮基因编辑(多基因敲除)回收抗性基因。

公开(公告)号：CN115786229A

公开(公告)日：2023-03-14

申请号：CN202211697472.8

申请日：2022-12-28

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 马金成 ,  温宇明 ,  游晓琳 ,  王海洪 ,  张文彬 ,  胡喆 ,  黄云超

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  C12N15/31 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明属于细胞工程技术领域，具体涉及一种用于红球菌基因敲除的重组系统及其应用。包括：Che9c60&61重组酶质粒、Flp重组酶和游离双链DNA敲除盒片段；游离双链DNA敲除盒片段包括：目的基因上下游同源臂序列及在其间插入包含抗性基因的两个同向FRT序列；Flp重组酶质粒的基因序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示。该用于红球菌基因敲除的重组系统可以有效对红球菌进行无痕敲除，庆大霉素抗性丢失效率达到了100％和78.7％；而且本发明基于FRT位点特异性重组酶Flpw方法可有效实现红球菌Rhodococcus ruber R1的高效无痕敲除，为下一轮基因编辑(多基因敲除)回收抗性基因。