公开(公告)号：CN105200074A

公开(公告)日：2015-12-30

申请号：CN201510602398.0

申请日：2015-09-21

Applicant: 华侨大学

Inventor： 戚智青 ,  齐晓雪 ,  侯丹 ,  唐黎

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种利用DNA非特异性结合蛋白HU蛋白构建克隆载体的方法，通过对待连接的DNA片段设计引物，并引入DNA同源同组序列，在分别进行扩增，扩增产物和HU混合，利用传统的转化方法在大肠杆菌中进行转化和克隆，得到重组DNA质粒。本发明方法不依赖于任何重组酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，用同源重组的方法和HU蛋白一起完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单，PCR产物一步定向克隆，目的片段与载体同源重组连接，常温反应时间短至15分钟，阳性率高达90％以上。

公开(公告)号：CN104845965A

公开(公告)日：2015-08-19

申请号：CN201510206587.6

申请日：2015-04-28

Applicant: 华侨大学

Inventor： 戚智青 ,  侯丹 ,  齐晓雪

IPC: C12N15/10 ,  C12Q1/68

Abstract: 一种利用多聚化合物提高RCA扩增效率的方法，包括：分别配置浓度为0.1g/ml的PEG 3350、0.2mg/l的mPEG-SC 2000和0.1mg/l的mPEG-SC 5000三种溶液；使用TempliPhi DNA测序模板扩增试剂盒，按照试剂盒的说明进行变性操作和培育操作，通过在滚环扩增过程中添加一定浓度的聚乙二醇或其衍生物，然后分别将RCA扩增产物于1％琼脂糖凝胶中进行电泳。本发明可以显著地提高滚环扩增的效率，增强滚环扩增的灵敏度，实现了对市售RCA试剂盒的进一步优化。

公开(公告)号：CN105200074B

公开(公告)日：2019-02-22

申请号：CN201510602398.0

申请日：2015-09-21

Applicant: 华侨大学

Inventor： 戚智青 ,  齐晓雪 ,  侯丹 ,  唐黎

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种利用DNA非特异性结合蛋白HU蛋白构建克隆载体的方法，通过对待连接的DNA片段设计引物，并引入DNA同源同组序列，在分别进行扩增，扩增产物和HU混合，利用传统的转化方法在大肠杆菌中进行转化和克隆，得到重组DNA质粒。本发明方法不依赖于任何重组酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，用同源重组的方法和HU蛋白一起完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单，PCR产物一步定向克隆，目的片段与载体同源重组连接，常温反应时间短至15分钟，阳性率高达90％以上。

公开(公告)号：CN105200036A

公开(公告)日：2015-12-30

申请号：CN201510602375.X

申请日：2015-09-21

Applicant: 华侨大学

Inventor： 戚智青 ,  唐黎 ,  侯丹 ,  齐晓雪 ,  张秀英 ,  刁勇 ,  王庆波 ,  潘海波 ,  高宏志 ,  刘楠辛

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种利用整合宿主因子来提高基于PCR的基因合成技术灵敏度的方法，其将含有脱氧核糖核甘酸，DNA聚合酶，寡核苷酸引物，以及作为模板的混合重叠寡核苷酸的反应液中加入IHF原液，按照常规PCR的解链，退火，延伸三个步骤进行反复的循环，从而将目的核酸片段合成并且扩增。本发明方法能够特异性地、高效地合成和扩增目标核酸序列。

公开(公告)号：CN105505972B

公开(公告)日：2019-02-26

申请号：CN201610040618.X

申请日：2016-01-21

Applicant: 华侨大学

Inventor： 戚智青 ,  刘楠辛 ,  侯丹

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明提供一种利用聚乙烯亚胺提高T4DNA连接酶连接效率的方法，包括以下步骤：对目的DNA片段设计带有酶切位点的引物；通过PCR反应获得两端带有酶切位点的目的DNA片段；经酶切得到待连接的线性化载体和目的DNA片段；配置聚乙烯亚胺溶液备用；在连接体系中添加预设体积的聚乙烯亚胺溶液进行连接反应；在大肠杆菌中进行转化和克隆，得到重组DNA分子的克隆。本发明可以显著地提高T4DNA连接酶的连接效率，填补了将电正性高分子聚合物(聚乙烯亚胺)应用于提高T4DNA连接酶连接效率这一领域的空白。

公开(公告)号：CN104593491B

公开(公告)日：2017-01-04

申请号：CN201410848236.0

申请日：2014-12-31

Applicant: 华侨大学

Inventor： 戚智青 ,  唐黎 ,  张秀英 ,  侯丹 ,  刁勇 ,  齐晓雪 ,  许瑞安 ,  马国兴 ,  杜民

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明提供一种利用整合宿主因子来提高PCR扩增灵敏度的方法，所述方法如下：将含有脱氧核苷三磷酸、DNA聚合酶、寡核苷酸引物、以及作为模板的核酸片段的反应溶液中，加入整合宿主因子IHF，按照常规PCR的解链、退火、延伸三个步骤，进行反复的热循环，从而将目标核酸片段扩增，所述引物与整合宿主因子IHF的摩尔比例为0.005-1。本发明方法能够特异性地、高效地扩增目标核酸序列。

公开(公告)号：CN105505972A

公开(公告)日：2016-04-20

申请号：CN201610040618.X

申请日：2016-01-21

Applicant: 华侨大学

Inventor： 戚智青 ,  刘楠辛 ,  侯丹

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/66

CPC classification number: C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N2800/101

Abstract: 本发明提供一种利用聚乙烯亚胺提高T4DNA连接酶连接效率的方法，包括以下步骤：对目的DNA片段设计带有酶切位点的引物；通过PCR反应获得两端带有酶切位点的目的DNA片段；经酶切得到待连接的线性化载体和目的DNA片段；配置聚乙烯亚胺溶液备用；在连接体系中添加预设体积的聚乙烯亚胺溶液进行连接反应；在大肠杆菌中进行转化和克隆，得到重组DNA分子的克隆。本发明可以显著地提高T4DNA连接酶的连接效率，填补了将电正性高分子聚合物(聚乙烯亚胺)应用于提高T4DNA连接酶连接效率这一领域的空白。

公开(公告)号：CN105441424A

公开(公告)日：2016-03-30

申请号：CN201510895401.2

申请日：2015-12-08

Applicant: 华侨大学

Inventor： 戚智青 ,  侯丹 ,  齐晓雪 ,  唐黎

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明提供一种利用整合宿主因子提高滚环扩增效率的方法，其特征在于：制备RCA反应液，在RCA反应液中加入IHF-β蛋白，所述RCA反应液中IHF-β蛋白的浓度为0.204～4.08ng/μl。本发明可以显著地提高滚环扩增的效率，增强滚环扩增的灵敏度，填补了有关利用耐热的DNA双链结合蛋白来提高RCA扩增效率的方法和应用领域的空白。

公开(公告)号：CN105400772A

公开(公告)日：2016-03-16

申请号：CN201510915182.X

申请日：2015-12-10

Applicant: 华侨大学

Inventor： 戚智青 ,  唐黎 ,  侯丹 ,  刁勇

IPC: C12N15/10

CPC classification number: C12N15/102

Abstract: 本发明提供一种基因定点多位点突变的方法，所述方法步骤如下：根据基因定点突变的碱基位置设计包含突变位点的引物，即通过引物设计在重叠区域引入突变位点；然后利用PCR扩增，制备包含突变位点的PCR片段；利用和非特异性DNA结合的蛋白HU取代重组酶从而将几个片段无缝拼接，以实现定点多位点的突变。

公开(公告)号：CN105200037A

公开(公告)日：2015-12-30

申请号：CN201510602428.8

申请日：2015-09-21

Applicant: 华侨大学

Inventor： 戚智青 ,  唐黎 ,  齐晓雪 ,  侯丹 ,  刁勇 ,  吕志民 ,  王庆波

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种利用非特异性结合蛋白来提高基于PCR的基因合成技术灵敏度的方法，其通过如下步骤实现：S1：设计需要合成的DNA序列，得到混合重叠寡核苷酸；其中，每个序列都有25bp的重叠寡核苷酸，以覆盖整个DNA序列(200到1500碱基)；S2：将含有脱氧核糖核甘酸，DNA聚合酶，寡核苷酸引物，以及作为模板的上述混合重叠寡核苷酸的反应液中加入HU蛋白原液；S3：按照常规PCR的解链，退火，延伸三个步骤进行反复的循环，将目的核酸片段合成并且扩增。采用上述方案后，本发明方法能够特异性地、高效地合成和扩增目标核酸序列。