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公开(公告)号：CN119955806A
公开(公告)日：2025-05-09
申请号：CN202510129329.6
申请日：2025-02-05
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种柑橘CsMYB62基因及其在柑橘枝刺软化中应用，属于柑橘育种领域。本发明发现柑橘CsMYB62基因是柑橘枝刺尖端硬化调控关键基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示或者在SEQ ID NO：1所示核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或几个核苷酸且具有编码同等活性蛋白的核苷酸序列。本发明发现利用基因编辑敲除柑橘CsMYB62基因能够让柑橘枝刺变得短而软，因此该基因可以作为培育枝刺弱化柑橘品种的重要候选基因。本发明可为柑橘枝刺性状遗传改良提供了重要的理论基础和基因资源。
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公开(公告)号：CN119162197A
公开(公告)日：2024-12-20
申请号：CN202411439001.6
申请日：2024-10-15
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种减数分裂相关基因CrMER3及其在柑橘无核育种中的应用，属于柑橘生物技术以及遗传育种领域。所述CrMER3基因存在CrMER3A、CrMER3a、CrMER3A‑103bp 3种基因型，其完整的核苷酸序列以及编码区核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1‑6所示。CrMER3a在现有柑橘品种中多有存在，可广泛应用于柑橘无核育种。用于鉴别柑橘品种是否携带柑橘无核基因CrMER3a的KASP分子标记，对应CrMER3基因的第2295个碱基，在携带/不携带CrMER3a基因的柑橘品种中该碱基为C/T，该分子标记或其扩增引物能够用于柑橘无核分子标记辅助选择育种。
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公开(公告)号：CN114868653A
公开(公告)日：2022-08-09
申请号：CN202210674420.2
申请日：2022-06-15
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种高效诱导柑橘单胚性品种产生四倍体的方法，属于柑橘生物育种技术领域。本发明的方法包括如下步骤：单胚性品种种子实生播种幼苗生长至高度5‑7cm时，用刀片在幼苗第一片真叶以下将其切断保留上胚轴长度2‑3cm；黑暗条件下诱导切口形成愈伤组织；愈伤组织形成后，用浓度为0.0125‑0.1％的秋水仙素溶液处理愈伤组织，光照条件下诱导愈伤组织再生成芽；当芽萌发长出2‑4片真叶时，流式细胞仪倍性鉴定结合柑橘单多胚特异分子标记筛选单胚性四倍体。本发明适用性广，利用愈伤组织单细胞再生的特性，获得的四倍体纯合、嵌合率低，且诱导效率高，方法简便易操作，无需组培，大大提高了柑橘单胚品种四倍体的获得效率。
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公开(公告)号：CN110699416B
公开(公告)日：2021-08-31
申请号：CN201911042777.3
申请日：2019-10-30
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于柑橘原生质体高效检测蛋白质亚细胞定位方法，包括以下步骤：(1)将细胞器荧光蛋白标记载体转化农杆菌，得到重组农杆菌；(2)重组农杆菌侵染柑橘外植体，获得表达细胞器荧光蛋白标记的柑橘材料；(3)将待测基因克隆到荧光不同于步骤(1)的荧光标记表达载体，获得待测基因荧光标记载体；(4)酶解步骤(2)得到的柑橘材料，分离纯化并获得表达细胞器荧光蛋白标记的柑橘原生质体；(5)通过PEG介导，将待测基因荧光标记载体转化步骤(4)获得的柑橘原生质体，培养24‑48h后，激光共聚焦显微镜下观察，两种荧光蛋白标记重合则表明待测基因表达蛋白定位于该细胞器。本发明方法简单、便捷、高效、成本低，成功率大幅提高。
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公开(公告)号：CN110669863A
公开(公告)日：2020-01-10
申请号：CN201911042998.0
申请日：2019-10-30
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一组柑橘线粒体InDel分子标记及其应用，属于植物分子标记辅助种质资源鉴定技术领域。本发明的5对柑橘线粒体InDel分子标记引物序列如SEQ ID NO.1-10所示，使用本发明的分子标记引物能够可快速、准确鉴定橘属、枳属和山金柑种质，能够鉴定柑橘原生质体融合后代线粒体来源，能够分析亲本未知柑橘品种母本来源。本发明在保护和利用野生柑橘资源上具重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110699416A
公开(公告)日：2020-01-17
申请号：CN201911042777.3
申请日：2019-10-30
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于柑橘原生质体高效检测蛋白质亚细胞定位方法，包括以下步骤：(1)将细胞器荧光蛋白标记载体转化农杆菌，得到重组农杆菌；(2)重组农杆菌侵染柑橘外植体，获得表达细胞器荧光蛋白标记的柑橘材料；(3)将待测基因克隆到荧光不同于步骤(1)的荧光标记表达载体，获得待测基因荧光标记载体；(4)酶解步骤(2)得到的柑橘材料，分离纯化并获得表达细胞器荧光蛋白标记的柑橘原生质体；(5)通过PEG介导，将待测基因荧光标记载体转化步骤(4)获得的柑橘原生质体，培养24-48h后，激光共聚焦显微镜下观察，两种荧光蛋白标记重合则表明待测基因表达蛋白定位于该细胞器。本发明方法简单、便捷、高效、成本低，成功率大幅提高。
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公开(公告)号：CN105647965A
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201610208362.9
申请日：2016-04-06
Applicant: 华中农业大学
CPC classification number: C12N15/8206 , C12N5/04 , C12N2509/00
Abstract: 本发明公开了一种柑橘原生质体转化方法，包括以下步骤：(1)向柑橘原生质体中添加质粒和浓度在40-60％之间的聚乙二醇-钙溶液，每100μl柑橘原生质体加入10-15μg质粒和110μl所述聚乙二醇-钙溶液，混匀静置；(2)将混合物45-47℃热激处理5-9分钟；(3)向经热激处理的混合物加入W5溶液，每100μl柑橘原生质体对应W5溶液440μl，混匀后离心留取沉淀物；(4)向获得的沉淀物加入WI溶液，每100μl柑橘原生质体对应WI溶液600-800μl，培养24至48小时。本发明提供的原生质体转化方法，转化率大幅提高。
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公开(公告)号：CN103320464B
公开(公告)日：2015-01-07
申请号：CN201310242182.9
申请日：2013-06-18
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用发根农杆菌高效诱导枳产生毛状根的方法及应用，方法易行，操作简便，共转化毛状根诱导频率高，离体毛状根可在MT基本培养基上自主生长，生长条件容易控制，实验观察方便，该毛状根体系因为含有DR5:YFP:GUS报告基因，且DR5启动子受生长素诱导表达，因此可以根据YFP荧光和GUS染色结果直观的观察毛状根生长和发育过程中内源生长素的分布和表达模式；克服了枳根系发育研究常规方法中存在的诸如根系生长在土壤中，观察、取材不便，生长环境难以控制等问题。
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公开(公告)号：CN119876455A
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202510049940.8
申请日：2025-01-13
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种与柑橘种胚颜色紧密连锁的KASP分子标记及其应用，属于生物技术领域。本发明通过BSA‑seq定位到一个与柑橘种胚白/绿色性状紧密连锁的SNP位点，其位于甜橙二代参考基因组第5号染色体第8739586位，该位点碱基类型为T或G，TT或TG基因型、GG基因型对应的柑橘种胚颜色为白色、绿色。本发明利用该SNP位点开发了KASP分子标记，通过检测该SNP位点可以直接用于种胚颜色和相对应的基因型鉴定，该标记开发与实施不仅可以有效鉴定柑橘种胚颜色，还能准确预测无核品种的种胚颜色，用于辅助柑橘杂交育种亲本选配；利用该标记还可快速鉴定多胚品种的有性胚，提高以多胚品种为母本的有性杂交育种效率。
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