公开(公告)号：CN110699416B

公开(公告)日：2021-08-31

申请号：CN201911042777.3

申请日：2019-10-30

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 伍小萌 ,  杨雯惠 ,  刘丹 ,  王鹏蔚 ,  郭文武

IPC: C12Q1/02 ,  G01N33/68 ,  G01N21/64 ,  C12N15/84

Abstract: 本发明公开了一种基于柑橘原生质体高效检测蛋白质亚细胞定位方法，包括以下步骤：(1)将细胞器荧光蛋白标记载体转化农杆菌，得到重组农杆菌；(2)重组农杆菌侵染柑橘外植体，获得表达细胞器荧光蛋白标记的柑橘材料；(3)将待测基因克隆到荧光不同于步骤(1)的荧光标记表达载体，获得待测基因荧光标记载体；(4)酶解步骤(2)得到的柑橘材料，分离纯化并获得表达细胞器荧光蛋白标记的柑橘原生质体；(5)通过PEG介导，将待测基因荧光标记载体转化步骤(4)获得的柑橘原生质体，培养24‑48h后，激光共聚焦显微镜下观察，两种荧光蛋白标记重合则表明待测基因表达蛋白定位于该细胞器。本发明方法简单、便捷、高效、成本低，成功率大幅提高。

公开(公告)号：CN110699416A

公开(公告)日：2020-01-17

申请号：CN201911042777.3

申请日：2019-10-30

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 伍小萌 ,  杨雯惠 ,  刘丹 ,  王鹏蔚 ,  郭文武

IPC: C12Q1/02 ,  G01N33/68 ,  G01N21/64 ,  C12N15/84

Abstract: 本发明公开了一种基于柑橘原生质体高效检测蛋白质亚细胞定位方法，包括以下步骤：(1)将细胞器荧光蛋白标记载体转化农杆菌，得到重组农杆菌；(2)重组农杆菌侵染柑橘外植体，获得表达细胞器荧光蛋白标记的柑橘材料；(3)将待测基因克隆到荧光不同于步骤(1)的荧光标记表达载体，获得待测基因荧光标记载体；(4)酶解步骤(2)得到的柑橘材料，分离纯化并获得表达细胞器荧光蛋白标记的柑橘原生质体；(5)通过PEG介导，将待测基因荧光标记载体转化步骤(4)获得的柑橘原生质体，培养24-48h后，激光共聚焦显微镜下观察，两种荧光蛋白标记重合则表明待测基因表达蛋白定位于该细胞器。本发明方法简单、便捷、高效、成本低，成功率大幅提高。