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公开(公告)号：CN116555275A
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202310115281.4
申请日：2023-02-15
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/12 , C12Q1/6888 , C12Q1/6879 , C12Q1/6869 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于水产养殖动物分子标记筛选领域。具体涉及克氏原螯虾性别决定基因PcWNT2b的克隆及分子标记与应用。通过对克氏原螯虾雌雄个体比较重测序及图位克隆，确定性别决定基因所在的区间，并获得区间内1个性别相关的基因，将该基因命名为PcWNT2b，该基因CDS序列如SEQ NO：1，蛋白质序列如SEQ NO：2，以该基因DNA序列设计分子标记PcSDGM，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3。以基因组DNA为模板进行扩增，对PCR产物进行纯化测序，测序结果与SEQ NO:3比对，若序列相同且峰图为单峰判定为雌性，若前180bp相同，峰图为双峰，判定为雄性。该基因定位为克氏原螯虾单性育种奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113897442A
公开(公告)日：2022-01-07
申请号：CN202111298317.4
申请日：2021-11-04
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于动物分子标记筛选领域，具体涉及克氏原螯虾中一个抗病基因及其抗病优异单倍型标记的应用。从克氏原螯虾Cluster‑48199(R))基因组中获得一个基因片段，该基因片段全长为559bp；该基因片段即是本发明克隆的分子标记，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，在该基因片段的第335位(C/T)，450位(C/T)和469位(G/A)存在一个等位基因的突变位点。本发明还涉及扩增Cluster‑48199(R)基因的引物组合，和用于检测该分子标记应用的引物组合。本发明利用转录组技术挖掘出克氏原螯虾新的抗病基因，并筛选出其抗病SNP单倍型标记。
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公开(公告)号：CN114959056B
公开(公告)日：2024-05-17
申请号：CN202210523775.1
申请日：2022-05-13
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6879 , C12Q1/6858 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于动物分子标记筛选领域。具体涉及一种鉴定雌性克氏原螯虾的SSR标记及其应用。本发明主要步骤为(1)分别提取雌、雄性克氏原螯虾基因组DNA。(2)对雌雄群体克氏原螯虾的DNA样本进行PCR检测，设计相关引物扩增目片段，通过琼脂糖电泳检测目的片段是否被扩增出。(3)利用PAGE胶电泳检测并进行统计分析。通过PAGE胶电泳后显影、读带，对雌雄克氏原螯虾群体间的带型进行统计分析。结果表明：检测到的雌性和雄性克氏原螯虾群体样本显示所有雌性或雄性样本在PCM1237位点含有A、B、C三种等位基因，雌性克氏原螯虾基因型为纯合型或杂合型，而雄性克氏原螯虾基因型仅为纯合型。即杂合型一定是雌性克氏原螯虾。
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公开(公告)号：CN113502337B
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN202110792139.4
申请日：2021-07-13
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6858 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于水产养殖分子标记筛选技术领域。具体涉及一种提高克氏原螯虾抗病能力的SNP分子标记及应用。发明的特征为：分别提取随机收集的克氏原螯虾RNA，通过反转录获得其cDNA。根据克氏原螯虾抗病基因Crustin基因和ALF基因序列设计引物组合，利用引物组合对克氏原螯虾cDNA样本进行PCR扩增并得到目的片段，利用琼脂糖胶电泳检测并确认目的片段被扩增出。进一步通过一代测序手段获得其cDNA序列并进行序列比对，鉴定克氏原螯虾群体中Crustin和AFL基因编码区中的SNP位点，对两基因及其组合进行分型；比较各基因型之间抗病能力的差异，筛选得到抗病能力最强的基因型及其组合标记引物。可用于辅助选择。
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公开(公告)号：CN103122352B
公开(公告)日：2015-02-11
申请号：CN201210369096.X
申请日：2012-09-27
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/34 , C12N15/866 , A61K48/00 , A61P31/20
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2型重组杆状病毒及制备方法和应用，参照PCV2b分离株ORF2基因序列，人工合成ORF2基因，以pFBDPHmHNM1P10eGFP质粒为骨架，将合成的ORF2基因基因连入该质粒，得到一种杆状病毒转移载体pFBDPHm3ORF2，取测序鉴定正确的杆状病毒转移载体pFBDPHm3ORF2与DH10Bac大肠杆菌感受态细胞混合，筛选阳性菌落，得到重组杆粒rBac-PCV3ORF2，将该杆粒转染sf9细胞，获得重组杆状病毒QP-Ac-PCV3ORF2。重组杆状病毒高效地表达PCV2ORF2蛋白并形成病毒样颗粒。本发明的重组杆状病毒所表达包装形成的VLP制备灭活疫苗，免疫28日龄仔猪后可诱导机体产生特异性免疫反应，并能完全保护猪体免受圆环病毒强毒的攻击。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114959056A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210523775.1
申请日：2022-05-13
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6879 , C12Q1/6858 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于动物分子标记筛选领域。具体涉及一种鉴定雌性克氏原螯虾的SSR标记及其应用。本发明主要步骤为(1)分别提取雌、雄性克氏原螯虾基因组DNA。(2)对雌雄群体克氏原螯虾的DNA样本进行PCR检测，设计相关引物扩增目片段，通过琼脂糖电泳检测目的片段是否被扩增出。(3)利用PAGE胶电泳检测并进行统计分析。通过PAGE胶电泳后显影、读带，对雌雄克氏原螯虾群体间的带型进行统计分析。结果表明：检测到的雌性和雄性克氏原螯虾群体样本显示所有雌性或雄性样本在PCM1237位点含有A、B、C三种等位基因，雌性克氏原螯虾基因型为纯合型或杂合型，而雄性克氏原螯虾基因型仅为纯合型。即杂合型一定是雌性克氏原螯虾。
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公开(公告)号：CN113502337A
公开(公告)日：2021-10-15
申请号：CN202110792139.4
申请日：2021-07-13
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6858 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于水产养殖分子标记筛选技术领域。具体涉及一种提高克氏原螯虾抗病能力的SNP分子标记及应用。发明的特征为：分别提取随机收集的克氏原螯虾RNA，通过反转录获得其cDNA。根据克氏原螯虾抗病基因Crustin基因和ALF基因序列设计引物组合，利用引物组合对克氏原螯虾cDNA样本进行PCR扩增并得到目的片段，利用琼脂糖胶电泳检测并确认目的片段被扩增出。进一步通过一代测序手段获得其cDNA序列并进行序列比对，鉴定克氏原螯虾群体中Crustin和AFL基因编码区中的SNP位点，对两基因及其组合进行分型；比较各基因型之间抗病能力的差异，筛选得到抗病能力最强的基因型及其组合标记引物。可用于辅助选择。
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公开(公告)号：CN103421783B
公开(公告)日：2015-06-10
申请号：CN201210543608.X
申请日：2012-12-13
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/11 , C12Q1/68 , A01H5/00
Abstract: 本发明一个水稻组成型启动子功能区域的鉴定及应用属于植物基因工程技术领域。从两个水稻品种中克隆到同一组成型表达的8个不同长度的启动子(ZS1、ZS2、ZS3、ZS4、NYZ1、NYZ2、NYZ3、NYZ4)，其核苷酸序列分别如SEQID1-8所示。上述启动子在转化植株的各个组织中均有表达，其表达强度在灌浆期的种子中最强。本发明公开了这8个启动子及其相应表达载体的制备方法，通过农杆菌介导的转基因方法导入水稻宿主。本发明还公开了该启动子的功能区域、功能位点和一个功能分子标记的开发，该功能分子标记可用于不同水稻品种中种子蛋白质含量的预测。
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公开(公告)号：CN103421805B
公开(公告)日：2015-01-14
申请号：CN201210543502.X
申请日：2012-12-13
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程领域。公开了一种控制水稻胚乳蛋白质含量的主效基因qpc1及其等位基因的应用，该主效基因的序列如SEQ ID NO：1所示，其等位基因的序列如SEQ ID NO：2所示。预测了该蛋白质为氨基酸跨膜转运蛋白，具有PF01490保守结构域。通过比较测序，发现在9.9kb范围内两个品种间存在23个共同的碱基差异，其中15个突变位于启动子区，7个位于第一内含子区域，1个突变位于编码区，但并没有改变编码的氨基酸序列。利用转基因获得了转qpc1基因的水稻植株，超表达和互补转化的转基因植株都表现出比对照种子蛋白质含量显著提高，而在RNAi抑制表达的转基因植株中都表现出比对照种子蛋白质含量显著降低。
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公开(公告)号：CN103122352A
公开(公告)日：2013-05-29
申请号：CN201210369096.X
申请日：2012-09-27
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/34 , C12N15/866 , A61K48/00 , A61P31/20
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2型重组杆状病毒及制备方法和应用，参照PCV2b分离株ORF2基因序列，人工合成ORF2基因，以pFBDPHmHNM1P10eGFP质粒为骨架，将合成的ORF2基因基因连入该质粒，得到一种杆状病毒转移载体pFBDPHm3ORF2，取测序鉴定正确的杆状病毒转移载体pFBDPHm3ORF2与DH10Bac大肠杆菌感受态细胞混合，筛选阳性菌落，得到重组杆粒rBac-PCV3ORF2，将该杆粒转染sf9细胞，获得重组杆状病毒QP-Ac-PCV3ORF2。重组杆状病毒高效地表达PCV2ORF2蛋白并形成病毒样颗粒。本发明的重组杆状病毒所表达包装形成的VLP制备灭活疫苗，免疫28日龄仔猪后可诱导机体产生特异性免疫反应，并能完全保护猪体免受圆环病毒强毒的攻击。
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