公开(公告)号：CN104560888A

公开(公告)日：2015-04-29

申请号：CN201310496992.7

申请日：2013-10-21

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 金梅林 ,  李国红 ,  周明光 ,  徐高原 ,  洪灯 ,  左静 ,  徐晓娟 ,  喻文波 ,  王丹 ,  张盼 ,  陈绣镯 ,  陈焕春

IPC: C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种H9N2亚型禽流感病毒的大规模培养方法，本方法中H9N2病毒在MDCK适应快速，适应后病毒HA效价为28；以7.5L反应器为种细胞罐，cytodex1为载体培养MDCK细胞为种子细胞，放大到40L固定床篮式搅拌系统反应器的大规模培养，收获血凝效价（HA）可以达到210H9N2病毒80L。本方法生产的病毒效价高、产量大，方法易于标准化，适用于所有的H9亚型流感病毒，解决了目前H9N2禽流感病毒在MDCK细胞上培养病毒滴度不能满足疫苗生产的难题。

公开(公告)号：CN102732487B

公开(公告)日：2014-03-26

申请号：CN201210193365.1

申请日：2012-06-13

Applicant: 武汉科前动物生物制品有限责任公司 ,  华中农业大学 ,  中国兽医药品监察所

Inventor： 金梅林 ,  李国红 ,  蒋桃珍 ,  徐高原 ,  李俊平 ,  周明光 ,  洪灯 ,  左静 ,  涂加刚 ,  邸海波 ,  韦大坤 ,  徐玲莉 ,  陈焕春

IPC: C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明一种生物反应器大规模培养的方法，其步骤：（1）重组H5N1禽流感病毒在MDCK细胞上适应；（2）病毒株作为反应器大规模培养病毒种子批制备，种子批病毒代次≥F6；血凝效价≥28；EID50≥107.5；（3）以聚酯片为载体培养MDCK细胞，以聚酯片为载体，反应器为篮式固定床，每克载体投放细胞；培养基为新生牛血清DMEM；（4）培养的MDCK细胞接种病毒，病毒稀释液清洗细胞，病毒接种；吸附后更换细胞维持液；（5）MDCK细胞维持和病毒增殖，搅拌，更换细胞维持液；（6）监测血凝效价收获病毒，收获反应器培养体积病毒液。方法易行，操作简便，适应后病毒HA效价>27，解决了目前重组H5亚型禽流感病毒在MDCK细胞上培养病毒滴度不能满足疫苗生产的难题。

公开(公告)号：CN102732487A

公开(公告)日：2012-10-17

申请号：CN201210193365.1

申请日：2012-06-13

Applicant: 武汉科前动物生物制品有限责任公司 ,  华中农业大学 ,  中国兽医药品监察所

Inventor： 金梅林 ,  李国红 ,  蒋桃珍 ,  徐高原 ,  李俊平 ,  周明光 ,  洪灯 ,  左静 ,  涂加刚 ,  邸海波 ,  韦大坤 ,  徐玲莉 ,  陈焕春

IPC: C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明一种生物反应器大规模培养的方法,其步骤:（1）重组H5N1禽流感病毒在MDCK细胞上适应；（2）病毒株作为反应器大规模培养病毒种子批制备，种子批病毒代次≥F6；血凝效价≥28；EID50≥107.5；（3）以聚酯片为载体培养MDCK细胞，以聚酯片为载体，反应器为篮式固定床，每克载体投放细胞；培养基为新生牛血清DMEM；（4）培养的MDCK细胞接种病毒，病毒稀释液清洗细胞，病毒接种；吸附后更换细胞维持液；（5）MDCK细胞维持和病毒增殖，搅拌，更换细胞维持液；（6）监测血凝效价收获病毒，收获反应器培养体积病毒液。方法易行，操作简便，适应后病毒HA效价>27，解决了目前重组H5亚型禽流感病毒在MDCK细胞上培养病毒滴度不能满足疫苗生产的难题。