公开(公告)号：CN101736085B

公开(公告)日：2012-10-10

申请号：CN200910272782.3

申请日：2009-11-18

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 郭爱珍 ,  白智迪 ,  石磊 ,  胡长敏 ,  彭清洁 ,  陈焕春 ,  巴小亮 ,  任泽民

IPC: C12Q1/68 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明属于动物病原分子检测领域，涉及牛支原体的环介导等温扩增检测方法。其步骤包括：(1)引物合成：根据牛支原体特异性基因UvrC的序列设计两对特异引物；(2)培养牛支原体；(3)提取牛支原体总DNA；(4)环介导等温扩增反应和(5)环介导等温扩增反应产物分析。在凝胶成像系统的紫外灯下观察是否有梯形条带，且其中最小的一条为157bp大小，或加入SYBR Green I后，若扩增产物变为黄绿色则为牛支原体阳性，若扩增产物为棕色则为牛支原体阴性。本发明可以100％扩增到临床分离到的牛支原体，且特异性强，对呼吸道常见菌可以作鉴别检测。本发明灵敏度高，检测下限为10个拷贝的阳性质粒。1小时出结果。实用性强，不需要昂贵的精密仪器。

公开(公告)号：CN103509756B

公开(公告)日：2015-04-08

申请号：CN201210201726.2

申请日：2012-06-19

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 郭爱珍 ,  任泽民 ,  陈颖钰 ,  胡长敏 ,  张瑞 ,  崔鹏 ,  陈焕春

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/12 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种牛支原体单克隆抗体及制备方法和应用，一种牛支原体单克隆抗体的制备方法，其步骤是：1）制备牛支原体抗原；2）抗原免疫小鼠；3）制备分泌牛支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞以及单抗腹水；4）单抗纯化。本发明用牛支原体地方分离株HB0801抗原免疫小鼠后，用杂交瘤细胞技术获得能高效分泌牛支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株1C11，CCTCC NO：C201218，所产生的单克隆抗体可与牛支原体和无乳支原体特异性结合，利用以上单克隆抗体建立了检测牛支原体抗原的夹心ELISA，该方法操作简单，所需时间短，灵敏度高。

公开(公告)号：CN103509756A

公开(公告)日：2014-01-15

申请号：CN201210201726.2

申请日：2012-06-19

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 郭爱珍 ,  任泽民 ,  陈颖钰 ,  胡长敏 ,  张瑞 ,  崔鹏 ,  陈焕春

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/12 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种牛支原体单克隆抗体及制备方法和应用，一种牛支原体单克隆抗体的制备方法，其步骤是：1）制备牛支原体抗原；2）抗原免疫小鼠；3）制备分泌牛支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞以及单抗腹水；4）单抗纯化。本发明用牛支原体地方分离株HB0801抗原免疫小鼠后，用杂交瘤细胞技术获得能高效分泌牛支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株1C11，CCTCCNO：C201218，所产生的单克隆抗体可与牛支原体和无乳支原体特异性结合，利用以上单克隆抗体建立了检测牛支原体抗原的夹心ELISA，该方法操作简单，所需时间短，灵敏度高。

公开(公告)号：CN101736085A

公开(公告)日：2010-06-16

申请号：CN200910272782.3

申请日：2009-11-18

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 郭爱珍 ,  白智迪 ,  石磊 ,  胡长敏 ,  彭清洁 ,  陈焕春 ,  巴小亮 ,  任泽民

IPC: C12Q1/68 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明属于动物病原分子检测领域，涉及牛支原体的环介导等温扩增检测方法。其步骤包括：(1)引物合成：根据牛支原体特异性基因UvrC的序列设计两对特异引物；(2)培养牛支原体；(3)提取牛支原体总DNA；(4)环介导等温扩增反应和(5)环介导等温扩增反应产物分析。在凝胶成像系统的紫外灯下观察是否有梯形条带，且其中最小的一条为157bp大小，或加入SYBR Green I后，若扩增产物变为黄绿色则为牛支原体阳性，若扩增产物为棕色则为牛支原体阴性。本发明可以100％扩增到临床分离到的牛支原体，且特异性强，对呼吸道常见菌可以作鉴别检测。本发明灵敏度高，检测下限为10个拷贝的阳性质粒。1小时出结果。实用性强，不需要昂贵的精密仪器。