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公开(公告)号：CN112391370B
公开(公告)日：2023-02-07
申请号：CN201910743114.8
申请日：2019-08-13
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种制备油松针叶原生质体的方法。本发明首先公开了用于制备油松针叶原生质体的组合物，包括纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶；所述组合物中，纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶的质量比为25∶4∶10。本发明进一步公开了包含上述组合物的酶解液和成套试剂及油松针叶原生质体的制备方法。本发明以油松幼嫩针叶作为材料，通过调节酶解体系和洗涤体系，建立油松原生质体制备体系。该体系制备得到的原生质体数量及活性都较好，为后期油松功能基因的亚细胞定位、蛋白质互作、下游靶基因筛选、单细胞测序、原生质体悬浮培养等研究提供了技术保障。
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公开(公告)号：CN112391370A
公开(公告)日：2021-02-23
申请号：CN201910743114.8
申请日：2019-08-13
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种制备油松针叶原生质体的方法。本发明首先公开了用于制备油松针叶原生质体的组合物，包括纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶；所述组合物中，纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶的质量比为25∶4∶10。本发明进一步公开了包含上述组合物的酶解液和成套试剂及油松针叶原生质体的制备方法。本发明以油松幼嫩针叶作为材料，通过调节酶解体系和洗涤体系，建立油松原生质体制备体系。该体系制备得到的原生质体数量及活性都较好，为后期油松功能基因的亚细胞定位、蛋白质互作、下游靶基因筛选、单细胞测序、原生质体悬浮培养等研究提供了技术保障。
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公开(公告)号：CN109402167A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811496734.8
申请日：2018-12-07
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12N15/82
Abstract: 本发明公开了一种在油松下胚轴中实现基因瞬时表达的方法，包括以下步骤：1)油松下胚轴的预处理；2)油松下胚轴组织预侵染的农杆菌菌液培养和处理；3)将下胚轴组织浸泡于导入了35S:Gus基因序列的农杆菌侵染溶液；4)超声波处理组织实现基因转入；5)下胚轴组织侵染后的继续培养。本发明建立的基因瞬时表达方法能够较高效地实现基因在油松下胚轴中表达，操作简单且结果可靠，可为油松基因功能验证和调控关系研究提供技术支持。
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公开(公告)号：CN119464317B
公开(公告)日：2025-03-28
申请号：CN202510019294.0
申请日：2025-01-07
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于遗传工程及农业生物技术领域，具体涉及一种油松种子休眠解除程度标记基因Pt8G06080和蛋白及其在判定油松休眠程度中的应用。本发明所述油松种子休眠解除程度标记基因Pt8G06080及其蛋白均能用于判定油松种子的休眠解除。此外，本发明还提供的了特异性扩增上述基因的引物对，使用该引物对能特异性扩增Pt8G06080基因，并通过比较待测样本和参考样本中Pt8G06080基因的表达量，能够实现对待测样本休眠解除状态的准确判定，且精度更高，科学性更强，可重复性好。
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公开(公告)号：CN118291529B
公开(公告)日：2024-09-03
申请号：CN202410718122.8
申请日：2024-06-05
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明提供了一种发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，将带有RUBY报告基因的载体转化到发根根瘤菌中；当油松种子苗的茎长距根部超过3cm时，切掉根部，将伤口处浸没在发根根瘤菌重悬液中，并进行抽真空；将植株根部伤口处裹满发根根瘤菌菌体后，移栽至土培基质中培养30~45d，当愈伤组织分化为再生不定根时，观察再生不定根的颜色，判断是否为植物阳性转化不定根。本发明所述构建的体系突破了油松遗传转化困难的技术屏障，为油松重要基因的功能以及根茎之间信号转导等相关研究工作提供了技术操作手段，并且为后续油松乃至其他针叶树种的关键功能基因功能鉴定以及遗传修饰种质创制提供了技术支撑和指导。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110724660B
公开(公告)日：2021-11-23
申请号：CN201911139202.3
申请日：2019-11-20
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12N5/04
Abstract: 本发明公开了一种制备樟子松针叶原生质体的方法，属于物细胞生物技术领域。所述方法包括（1）获得墇子松幼苗针叶，获得所述针叶叶条；（2）将所述叶条进行预处理；（3）将叶条放入酶解液中进行酶解；（4）将叶条从酶解液中取出，放入W5'溶液中，室温、避光、振荡，使得原生质体释放至所述W5'溶液中；（5）将包含原生质体的W5'溶液转移至100μm的尼龙网上进行过滤；（6）将包含原生质体的W5'溶液置于冰上30min，吸取上清液，加入预冷的W5'溶液中重悬原生质体。利用本发明，可获得较多数量并且状态良好、耐受性强的原生质体。
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公开(公告)号：CN113502349A
公开(公告)日：2021-10-15
申请号：CN202111040874.6
申请日：2021-09-07
Applicant: 北京林业大学
Inventor： 林金星 , 杨舜垚 , 何其邹洪 , 张曦 , 王莉 , 李福明 , 林昌明 , 黄少伟 , 魏爱华 , 詹定举 , 狄贵明 , 李俊峰 , 马彦广 , 卢银喜 , 刘玄德 , 薛敦孟 , 贺国鑫 , 李世安 , 王浩 , 胡东阳 , 于洋 , 张咏 , 王丽娟 , 贾婉 , 陈惠敏 , 林文奖 , 陈亚斌 , 阮成江 , 吴世军 , 刘四黑 , 沈云 , 吴兵 , 张正 , 金飚 , 李卫星 , 王明先 , 陆金凯 , 徐源 , 钟磊 , 钟岁英 , 黄婷 , 邓乐平 , 张智霖 , 庞贞武 , 黄全东 , 孙雪阳 , 李悦 , 钮世辉 , 张莹莹 , 胡子建 , 沈微微 , 赵媛媛 , 张贵芳 , 胡海琳 , 徐黎 , 鄂一岚 , 许会敏
IPC: C12Q1/6895 , G01N33/68 , A01G2/10 , A01G31/00 , A01N37/42 , A01N37/10 , A01N43/38 , A01N43/90 , A01N37/44 , A01N43/653 , A01P21/00
Abstract: 本发明涉及树木老化时空模式鉴定、平茬复幼及扦插规模化繁育方法，包括对树木主干形成层和枝条中与老化和年龄相关基因的转录与翻译水平进行检测并建立树木老化模式，通过树木老化模式明确其具有强再生能力的幼化部位；对采穗母株进行定植，建立规模化的采穗圃；对采穗母株截顶促萌和重复修剪形成“矮桩平台式”株型，收获大量均匀、粗细适中的宜扦插复幼枝条；采用三元激素处理法对复幼枝条进行促根处理，诱导复幼枝条产生大量不定根，大幅提高树木复幼枝条扦插成活率和生根效率。本发明突破了树木扦插的多个技术瓶颈，具有繁育效率高、育苗流程化的特点，是目前最为直接且高效的树木规模化繁育方法。
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公开(公告)号：CN119464317A
公开(公告)日：2025-02-18
申请号：CN202510019294.0
申请日：2025-01-07
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于遗传工程及农业生物技术领域，具体涉及一种油松种子休眠解除程度标记基因Pt8G06080和蛋白及其在判定油松休眠程度中的应用。本发明所述油松种子休眠解除程度标记基因Pt8G06080及其蛋白均能用于判定油松种子的休眠解除。此外，本发明还提供的了特异性扩增上述基因的引物对，使用该引物对能特异性扩增Pt8G06080基因，并通过比较待测样本和参考样本中Pt8G06080基因的表达量，能够实现对待测样本休眠解除状态的准确判定，且精度更高，科学性更强，可重复性好。
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公开(公告)号：CN116397008A
公开(公告)日：2023-07-07
申请号：CN202211367270.7
申请日：2022-11-02
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12Q1/6809 , C12Q1/6895 , C12N15/29 , C12N15/11 , G16B40/00
Abstract: 本发明公开了一种油松年龄标记基因PtMADS26的筛选鉴定方法与应用，涉及林木育种技术领域。本发明基于加权共表达网络分析筛选和鉴定到油松年龄标记基因PtMADS26，进一步通过实时荧光定量分析实验检测PtMADS26在不同年龄油松中的表达模式，并测定其在反复截顶和未截顶油松中的表达水平，从而确定其参与油松成熟态向幼年态的调控。本发明通过共表达网络分析为挖掘树木年龄标记基因及互作关系预测提供了新的思路，在克服多年生树木成熟效应，促进无性繁殖，缩短育种年限方面具有重要意义。
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公开(公告)号：CN109679890A
公开(公告)日：2019-04-26
申请号：CN201910023159.8
申请日：2019-01-10
Applicant: 北京林业大学
CPC classification number: C12N5/0025 , C12N15/8205
Abstract: 本发明公开了一种油松愈伤组织瞬时表达基因功能鉴定方法。本发明提供了一种制备油松愈伤组织的方法，包括如下步骤：以油松下胚轴为外植体，将所述外植体在诱导培养基中诱导培养，得到油松愈伤组织；所述诱导培养基含有1-2mg/L2,4-D和1-1.5mg/L 6-BA。本发明以油松实生幼苗的下胚轴为外植体，通过调节培养条件，建立油松愈伤组织诱导条件。该研究优化的油松愈伤组织瞬时转化体系有助于外源基因在油松愈伤组织内的表达，为后期通过转基因技术研究目标基因功能奠定了技术基础。
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