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公开(公告)号：CN118773170A
公开(公告)日：2024-10-15
申请号：CN202411108069.6
申请日：2024-08-13
Applicant: 北京化工大学
Abstract: 本发明涉及催化技术领域。本发明提供了一种具有双酶活性的糖苷水解酶及其重组菌在制备稀有人参皂苷中的应用及方法，所述糖苷水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。使用本发明中的糖苷水解酶或者表达该酶的重组菌可催化人参皂苷R1生产稀有人参皂苷Rh1，以及催化人参皂苷Rb1生产稀有人参皂苷C‑K。本发明所述糖苷水解酶同时具有木糖苷酶和葡萄糖苷酶活性，因此使用该酶或重组菌可以同时断裂人参皂苷R1苷元上C‑6位的木糖苷键和葡萄糖苷键生成稀有人参皂苷Rh1，对比单一酶活性的糖苷水解酶制备稀有人参皂苷的方法，具有工艺简单经济节约的优点，非常适合于大规模工业化生产。
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公开(公告)号：CN117925554A
公开(公告)日：2024-04-26
申请号：CN202410110107.5
申请日：2024-01-26
Applicant: 北京化工大学
Abstract: 本发明提供了一种环化蔗糖磷酸化酶及其应用，属于酶催化技术领域。所述环化蔗糖磷酸化酶通过下述linker中的任意一种将如SEQ ID NO.1所示的蔗糖磷酸化酶的N端和C端分别连接不同的异肽键得到；linker 1：GSG；linker 2：GSGSGSGSG；linker 3：GSGSGSGSGSGS；linker4：GSLVPRGSC；linker 5：EAAAKEAAAK；linker 6：GGGGGS；linker 7：SSSSSG；linker 8：GGGGSSSS。本发明制备的环化蔗糖磷酸化酶相比野生酶具有更高的催化活性和热稳定性，为2‑O‑α‑GG大规模酶法制备提供了新的可行性。
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公开(公告)号：CN111849959B
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202010817008.2
申请日：2020-08-14
Applicant: 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
Abstract: 本发明属于催化技术领域，本发明提供了一种利用共固定双酶催化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，包括如下步骤：将β‑葡萄糖苷酶、磷酸盐缓冲溶液、Fe3O4溶液、氯化铜溶液、木糖苷酶进行反应，得到共固定双酶；用共固定双酶和黄芪甲苷进行催化反应，得到环黄芪醇。本发明的方法克服了现有技术采用两步反应制备环黄芪醇工艺中中间体的提取分离问题，同时本发明的共固定双酶可以回收再利用，降低了生产成本，工艺简单，经济节约，非常适合于大规模工业化生产。本发明的共固定双酶对黄芪甲苷的转化率基本达到100％，底物黄芪甲苷完全转化成环黄芪醇。本发明得到的环黄芪醇的产品纯度可达78.3％以上。
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公开(公告)号：CN113699137B
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202111033981.6
申请日：2021-09-03
Applicant: 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域。本发明提供了一种黄芪甲苷木糖苷酶突变体及其应用，所述突变体的氨基酸序列是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列突变得到；所述突变的位点包括第202位、第322位、第372和第548位中的一种或多种。本发明中的黄芪甲苷木糖苷酶突变体通过4个位点的单点突变或组合突变，能够显著提高酶水解黄芪甲苷C3位置木糖苷键的水解活性，相较于野生型黄芪甲苷木糖苷酶，对底物黄芪甲苷的催化活性提高了1～20倍，大幅降低环黄芪醇工业生产的成本，使酶催化黄芪甲苷制备环黄芪醇的生产效率显著提高。
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公开(公告)号：CN113584000B
公开(公告)日：2024-05-28
申请号：CN202110019047.2
申请日：2021-01-07
Applicant: 北京化工大学
Abstract: 本发明公开了一种α‑L‑鼠李糖苷酶、其制备方法和应用，属于基因工程和生物催化领域。具体涉及一种新型α‑L‑鼠李糖苷酶氨基酸序列和编码基因、含有上述基因的重组载体和重组微生物、利用上述重组微生物发酵制备α‑L‑鼠李糖苷酶的方法以及所述α‑L‑鼠李糖苷酶在水解薯蓣皂苷制备薯蓣皂素中的应用。本发明提供的α‑L‑鼠李糖苷酶可以特异性水解植物黄姜中甾体皂苷C3位置外侧α‑L‑1,2‑鼠李糖苷键，具有催化效率高、热稳定性好、糖耐受性高等优点。此外，在所述α‑L‑鼠李糖苷酶和β‑D‑葡萄糖苷酶的共催化下，黄姜粗提物中的甾体皂苷几乎完全转化为薯蓣皂素，转化率高达98.5%，表明其在规模化皂素生产中具有良好的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112226481A
公开(公告)日：2021-01-15
申请号：CN202011171360.X
申请日：2020-10-28
Applicant: 北京化工大学
Abstract: 本发明提供了一种利用新型葡萄糖醛酸酶生物催化制备甘草次酸的方法，步骤为：通过基因工程手段筛选表达新型重组葡萄糖醛酸酶；以甘草酸为底物进行催化反应，得到纯度较高的甘草次酸；在磷酸盐缓冲溶液环境下，将β‑葡萄糖醛酸酶、Fe3O4@Zr‑2MIm孵育得到固定化酶；用固定化酶和甘草酸进行催化反应，得到甘草次酸。本发明中筛选出的β‑葡萄糖醛酸酶催化活性高，在2h内就能够将甘草酸快速完全的转化，且不会产生中间产物单葡萄糖醛酸甘草次酸，方便得到高纯度的甘草次酸。同时本发明的固定化酶可以回收再利用，降低了生产成本，工艺简单，经济节约，非常适合于大规模工业化生产。本发明的固定化酶对甘草酸的转化率达到95%以上，底物甘草酸基本完全转化成甘草次酸。
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公开(公告)号：CN120060214A
公开(公告)日：2025-05-30
申请号：CN202510205123.7
申请日：2025-02-24
Applicant: 北京化工大学
IPC: C12N9/42 , C12N9/26 , C12N9/10 , C12N9/24 , C07K19/00 , C12N15/70 , C12P33/20 , C12P19/44 , C12P33/00
Abstract: 一种构建酶多聚体提升酶催化活性的方法，包括如下步骤：通过基因工程手段将噬菌体海绵蛋白Acb2修饰于葡萄糖苷酶、葡萄糖醛酸酶、蔗糖磷酸化酶等的C端或N端；通过筛选和优化海绵蛋白与天然酶之间连接肽的种类及氨基酸数量获得催化活性更好的酶多聚体。本发明中所设计构建的海绵蛋白驱动团簇化酶聚集体体酶，相比野生酶比酶活获得了3.43倍的提升，kcat提升32.3倍。海绵蛋白酶多聚体催化活性高，制备工艺简单，适用范围广，具有应用于大规模工业化生产的潜力。
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公开(公告)号：CN118291565A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410394915.9
申请日：2024-04-02
Applicant: 北京化工大学
IPC: C12P19/56 , A61K31/704 , A61K36/484 , A61P39/06 , A61P31/12
Abstract: 本发明提供了一种甘草新苷及其分离纯化方法与应用，属于甘草新苷分离纯化技术领域。包括如下步骤：(1)将β‑葡萄糖醛酸酶或含有β‑葡萄糖醛酸酶的细菌、甘草酸类物质与磷酸盐缓冲液混合，反应8.0～10.0h，得到含有甘草新苷的反应液；(2)将反应液与无水乙醇混合，静置后调节pH值，离心获得上清；(3)将上清旋转蒸发后得到浓缩物，弃去液体，将剩下固体蒸干，获得高纯度甘草新苷。按照本发明的方法可以从高浓度的底物中分离纯化得到纯度高达90％以上的甘草新苷。工艺简单，适用于大规模工业化生产。
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公开(公告)号：CN113699137A
公开(公告)日：2021-11-26
申请号：CN202111033981.6
申请日：2021-09-03
Applicant: 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域。本发明提供了一种黄芪甲苷木糖苷酶突变体及其应用，所述突变体的氨基酸序列是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列突变得到；所述突变的位点包括第202位、第322位、第372和第548位中的一种或多种。本发明中的黄芪甲苷木糖苷酶突变体通过4个位点的单点突变或组合突变，能够显著提高酶水解黄芪甲苷C3位置木糖苷键的水解活性，相较于野生型黄芪甲苷木糖苷酶，对底物黄芪甲苷的催化活性提高了1～20倍，大幅降低环黄芪醇工业生产的成本，使酶催化黄芪甲苷制备环黄芪醇的生产效率显著提高。
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公开(公告)号：CN112226481B
公开(公告)日：2023-01-31
申请号：CN202011171360.X
申请日：2020-10-28
Applicant: 北京化工大学
Abstract: 本发明提供了一种利用新型葡萄糖醛酸酶生物催化制备甘草次酸的方法，步骤为：通过基因工程手段筛选表达新型重组葡萄糖醛酸酶；以甘草酸为底物进行催化反应，得到纯度较高的甘草次酸；在磷酸盐缓冲溶液环境下，将β‑葡萄糖醛酸酶、Fe3O4@Zr‑2MIm孵育得到固定化酶；用固定化酶和甘草酸进行催化反应，得到甘草次酸。本发明中筛选出的β‑葡萄糖醛酸酶催化活性高，在2h内就能够将甘草酸快速完全的转化，且不会产生中间产物单葡萄糖醛酸甘草次酸，方便得到高纯度的甘草次酸。同时本发明的固定化酶可以回收再利用，降低了生产成本，工艺简单，经济节约，非常适合于大规模工业化生产。本发明的固定化酶对甘草酸的转化率达到95%以上，底物甘草酸基本完全转化成甘草次酸。
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