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公开(公告)号：CN111893158B
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202010817259.0
申请日：2020-08-14
Applicant: 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
Abstract: 本发明涉及生物转化技术领域，具体涉及一种利用双酶复合转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法。本发明的方法是以黄芪甲苷为底物，利用木糖苷酶和葡萄糖苷酶双酶复合后，经过一步水解断裂底物C3位置的木糖苷键和C6位置的葡萄糖苷键得到环黄芪醇的方法。本发明得到的环黄芪醇的纯度能够达到98％以上，并且该方法操作简单，无污染，反应温度更温和，酶转化机理明确以及酶的底物适应性更宽，适合工业化生产。
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公开(公告)号：CN113699137A
公开(公告)日：2021-11-26
申请号：CN202111033981.6
申请日：2021-09-03
Applicant: 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域。本发明提供了一种黄芪甲苷木糖苷酶突变体及其应用，所述突变体的氨基酸序列是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列突变得到；所述突变的位点包括第202位、第322位、第372和第548位中的一种或多种。本发明中的黄芪甲苷木糖苷酶突变体通过4个位点的单点突变或组合突变，能够显著提高酶水解黄芪甲苷C3位置木糖苷键的水解活性，相较于野生型黄芪甲苷木糖苷酶，对底物黄芪甲苷的催化活性提高了1～20倍，大幅降低环黄芪醇工业生产的成本，使酶催化黄芪甲苷制备环黄芪醇的生产效率显著提高。
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公开(公告)号：CN113584100B
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202110904630.1
申请日：2021-08-07
Applicant: 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
IPC: C12P17/16
Abstract: 本发明提供了一种裂解酶在制备低聚原花青素中的应用以及蒸汽爆破联合裂解酶制备低聚原花青素的方法，涉及生物转化技术领域。所述裂解酶的氨基酸序列为SEQIDNO.1～5中的一种。蒸汽爆破联合裂解酶制备低聚原花青素的方法，包括以下步骤：葡萄籽用水浸泡后进行爆破处理，得到爆破样品；对所得爆破样品进行脱脂，得脱脂样品；将所得脱脂样品和提取液混合进行提取，得到高聚原花青素粗提物；将所得高聚原花青素粗提物和裂解酶混合，无氧条件下反应，得低聚原花青素。本申请所述制备低聚原花青素的方法具有高聚原花青素降解工艺简单、反应条件温和、环境污染小以及低聚原花青素得率高等优点。
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公开(公告)号：CN111849959B
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202010817008.2
申请日：2020-08-14
Applicant: 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
Abstract: 本发明属于催化技术领域，本发明提供了一种利用共固定双酶催化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，包括如下步骤：将β‑葡萄糖苷酶、磷酸盐缓冲溶液、Fe3O4溶液、氯化铜溶液、木糖苷酶进行反应，得到共固定双酶；用共固定双酶和黄芪甲苷进行催化反应，得到环黄芪醇。本发明的方法克服了现有技术采用两步反应制备环黄芪醇工艺中中间体的提取分离问题，同时本发明的共固定双酶可以回收再利用，降低了生产成本，工艺简单，经济节约，非常适合于大规模工业化生产。本发明的共固定双酶对黄芪甲苷的转化率基本达到100％，底物黄芪甲苷完全转化成环黄芪醇。本发明得到的环黄芪醇的产品纯度可达78.3％以上。
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公开(公告)号：CN113699137B
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202111033981.6
申请日：2021-09-03
Applicant: 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域。本发明提供了一种黄芪甲苷木糖苷酶突变体及其应用，所述突变体的氨基酸序列是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列突变得到；所述突变的位点包括第202位、第322位、第372和第548位中的一种或多种。本发明中的黄芪甲苷木糖苷酶突变体通过4个位点的单点突变或组合突变，能够显著提高酶水解黄芪甲苷C3位置木糖苷键的水解活性，相较于野生型黄芪甲苷木糖苷酶，对底物黄芪甲苷的催化活性提高了1～20倍，大幅降低环黄芪醇工业生产的成本，使酶催化黄芪甲苷制备环黄芪醇的生产效率显著提高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113584100A
公开(公告)日：2021-11-02
申请号：CN202110904630.1
申请日：2021-08-07
Applicant: 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
IPC: C12P17/16
Abstract: 本发明提供了一种裂解酶在制备低聚原花青素中的应用以及蒸汽爆破联合裂解酶制备低聚原花青素的方法，涉及生物转化技术领域。所述裂解酶的氨基酸序列为SEQIDNO.1～5中的一种。蒸汽爆破联合裂解酶制备低聚原花青素的方法，包括以下步骤：葡萄籽用水浸泡后进行爆破处理，得到爆破样品；对所得爆破样品进行脱脂，得脱脂样品；将所得脱脂样品和提取液混合进行提取，得到高聚原花青素粗提物；将所得高聚原花青素粗提物和裂解酶混合，无氧条件下反应，得低聚原花青素。本申请所述制备低聚原花青素的方法具有高聚原花青素降解工艺简单、反应条件温和、环境污染小以及低聚原花青素得率高等优点。
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公开(公告)号：CN111893158A
公开(公告)日：2020-11-06
申请号：CN202010817259.0
申请日：2020-08-14
Applicant: 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
Abstract: 本发明涉及生物转化技术领域，具体涉及一种利用双酶复合转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法。本发明的方法是以黄芪甲苷为底物，利用木糖苷酶和葡萄糖苷酶双酶复合后，经过一步水解断裂底物C3位置的木糖苷键和C6位置的葡萄糖苷键得到环黄芪醇的方法。本发明得到的环黄芪醇的纯度能够达到98％以上，并且该方法操作简单，无污染，反应温度更温和，酶转化机理明确以及酶的底物适应性更宽，适合工业化生产。
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公开(公告)号：CN113584001B
公开(公告)日：2024-05-28
申请号：CN202110019048.7
申请日：2021-01-07
Applicant: 北京化工大学
Abstract: 本发明公开了一种alpha‑L‑鼠李糖苷酶、其制备方法及应用。具体涉及一种新型alpha‑L‑鼠李糖苷酶的氨基酸序列、编码上述氨基酸序列的核苷酸序列、含有上述核苷酸序列的重组载体和重组宿主、利用上述重组宿主制备alpha‑L‑鼠李糖苷酶的方法以及所述alpha‑L‑鼠李糖苷酶在宝霍苷I生产中的应用。本发明所提供的alpha‑L‑鼠李糖苷酶具有催化效率高、热稳定性好、特异性高等优点。朝藿定C经葡萄糖苷酶快速催化水解后，再利用本发明中所提供的alpha‑L‑鼠李糖苷酶进一步催化水解其C3位置外侧鼠李糖苷键生成宝霍苷I，底物转化率高达99.5%、转化效率高、无副产物、步骤简单、反应时间短、污染小、适合工业化生产。
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公开(公告)号：CN107058445B
公开(公告)日：2020-11-20
申请号：CN201710319796.0
申请日：2017-05-09
Applicant: 北京化工大学
Abstract: 本发明公开了一种利用两步酶解法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法。具体涉及一种以黄芪甲苷为底物，利用两种不同的水解酶分别水解断裂黄芪甲苷C3位置的β‑木糖苷键和C6位置的β‑葡萄糖苷键而得到黄芪甲苷的苷元环黄芪醇，后经萃取、硅胶柱层析以及乙醇重结晶纯化得到纯度95％以上的环黄芪醇产品。本发明解决了化学法制备环黄芪醇过程中黄芪甲苷的三元环结构的破坏而导致的大量副产物的产生的问题以及克服了传统环黄芪醇制备方法中底物转化率低、步骤繁琐、污染环境等不足。而本发明的优点在于底物特异性高，底物黄芪甲苷全部转化，步骤简单，条件温和，成本低，是温和的生物制备方法，对环境无污染，适合工业化生产。
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公开(公告)号：CN107058445A
公开(公告)日：2017-08-18
申请号：CN201710319796.0
申请日：2017-05-09
Applicant: 北京化工大学
Abstract: 本发明公开了一种利用两步酶解法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法。具体涉及一种以黄芪甲苷为底物，利用两种不同的水解酶分别水解断裂黄芪甲苷C3位置的β‑木糖苷键和C6位置的β‑葡萄糖苷键而得到黄芪甲苷的苷元环黄芪醇，后经萃取、硅胶柱层析以及乙醇重结晶纯化得到纯度95％以上的环黄芪醇产品。本发明解决了化学法制备环黄芪醇过程中黄芪甲苷的三元环结构的破坏而导致的大量副产物的产生的问题以及克服了传统环黄芪醇制备方法中底物转化率低、步骤繁琐、污染环境等不足。而本发明的优点在于底物特异性高，底物黄芪甲苷全部转化，步骤简单，条件温和，成本低，是温和的生物制备方法，对环境无污染，适合工业化生产。
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