一种基于单分子荧光成像的细胞内miRNA定量方法

    公开(公告)号:CN110229870A

    公开(公告)日:2019-09-13

    申请号:CN201910270772.X

    申请日:2019-04-04

    Abstract: 本发明公开了一种细胞内miRNA定量方法。所述方法包括如下步骤:(1)离体的细胞经固定后进行细胞核染色;(2)向细胞中加入含有荧光探针的缓冲液,荧光探针与细胞内待检测miRNA发生可逆结合;(3)将细胞置于TIRF显微镜的载物台上进行检测,在明场下记录细胞形态,在宽场荧光记录细胞核位置,在HILO模式下记录单分子荧光强度-时间轨迹;(4)通过信号过滤,获得单分子荧光强度-时间轨迹呈现ON-OFF交替变化的单分子成像图,即为所述细胞内miRNA单分子成像图,经计数即得到细胞内miRNA的数量。本发明提供了一种“原位定量成像”的方式,利用高辨识度的单分子动力学指纹信号,对细胞内miRNA进行单分子定位与精准计数,突破胞内miRNA定量依赖于RNA提取的技术瓶颈。

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