公开(公告)号：CN101857877A

公开(公告)日：2010-10-13

申请号：CN201010159669.7

申请日：2010-04-29

Applicant: 中国医学科学院生物医学工程研究所

Inventor： 冷希岗 ,  王海燕 ,  宋丽萍 ,  朱敦皖 ,  刘兰霞 ,  董霞 ,  张海玲

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了含TFPI基因与GFP基因双顺反子的逆转录病毒真核表达载体及构建方法及应用，含TFPI基因与GFP基因双顺反子的逆转录病毒真核表达载体用下述方法制成：以序列表SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所述序列为引物，pIRES-TFPI为模板，扩增出以序列表SEQ ID NO.1所示的人类组织因子途径抑制因子基因的全长cDNA，将其插入到逆转录病毒载体pMSCV-IRES-GFP中，获得pMSCV-TFPI-IRES-GFP重组质粒，实现了TFPI和绿色荧光蛋白在EPCs内的非融合表达，两种蛋白之间功能互不干扰。在正常发挥TFPI生物学功能的同时，GFP的表达可作为转基因细胞的有效示踪手段，为研究携带TFPI基因的EPCs在体内的组织定位及分化情况提供了极大便利。