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公开(公告)号：CN119710049A
公开(公告)日：2025-03-28
申请号：CN202411980954.3
申请日：2024-12-31
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/113 , C12N15/11 , C12R1/35
Abstract: 本发明公开了基于ERA‑CRISPR/Cas12a一步法快速检测鸡毒支原体的试剂盒、应用及方法，本发明的鸡毒支原体可视化检测试剂盒，是基于鸡毒支原体新的核酸检测靶标hmpG1，待检样品先用裂解buffer裂解释放基因组DNA后，在恒温水浴锅或金属浴中进行ERA‑CRISPR/Cas12a一锅法反应，在crRNA引导序列介导下，Lb Cas12a酶与crRNA、靶标DNA结合形成三元复合物后，会激活cas12a的反式剪切活性，可任意切割反应体系中的ssDNA荧光探针以释放该探针上的荧光集团，然后用紫外灯检测荧光信号或用胶体金试纸条检测FAM及Biotin基团是否被切下进行结果判定。本发明快速检测鸡毒支原体的ERA‑CRISPR/cas12a一锅法技术，通过ERA扩增及CRISPR/cas12a特异性识别鸡毒支原体DNA靶标并切割，特异性强，检测灵敏度低至1.73pg/μL，可用于现场快速检测临床样品中的鸡毒支原体。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116837125A
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202311039454.5
申请日：2023-08-17
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12N15/113 , C12Q1/6804 , C12R1/63
Abstract: 本发明涉及一种基于LAMP‑CRISPR/Cas12b一体化体系快速检测副溶血性弧菌的试剂盒及其方法，包括LAMP引物、sgRNA引导序列、Cas12b酶和ssDNA荧光探针。本发明具有如下优点：可视化检测副溶血性弧菌的试剂盒通过先对待测样品进行LAMP扩增，sgRNA引导序列介导下，引导CRISPR‑Cas12b体系对LAMP扩增产物进行识别结合并切割目标双链DNA，并激活非特异性核酸酶功能，然后任意切割体系中的ssDNA荧光探针得到剪切产物，最后通过检测剪切产物的荧光信号，或用胶体金试纸条可视化检测反应体系中是否存在切下的FAM基团进行判断。本发明检测副溶血性弧菌的LAMP‑CRISPR/cas12b技术，通过LAMP扩增及sgRNA识别双重特异地对检测副溶血性弧菌进行检测，特异性强，且在灵敏度上可低至37CFU/mL，可现场快速检测到食品上污染的副溶血性弧菌。
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公开(公告)号：CN110295187A
公开(公告)日：2019-10-01
申请号：CN201910502863.1
申请日：2019-06-11
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种适用于鸭疫里默氏杆菌等黄杆菌科细菌的携带不同信号标签转座子的构建及其应用。本发明公开了22个含不同DNA标签序列的转座子Tn4351，以及包含该转座子的黄杆菌科细菌随机突变库，可用于筛选黄杆菌科细菌的毒力相关或体内存活相关基因等。本发明含DNA标签的Tn4351转座子，能快速、高效地筛选出鸭疫里默氏杆菌等黄杆菌科细菌的毒力相关基因或体内存活相关基因，以及从大量随机突变体中快速筛选免疫保护性良好的突变株，用以构建针对鸭疫里默氏杆菌等黄杆菌科细菌的弱毒疫苗，具有较好的经济效益和市场前景。
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公开(公告)号：CN119710048A
公开(公告)日：2025-03-28
申请号：CN202411980863.X
申请日：2024-12-31
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/113 , C12N15/11 , C12R1/35
Abstract: 本发明公开了基于ERA‑CRISPR/Cas12a一步法快速检测鸡滑液囊支原体的试剂盒、应用及方法，本发明的可视化检测试剂盒，是基于鸡滑液囊支原体新的核酸检测靶标scpA，待检样品先用裂解buffer裂解释放基因组DNA后，在恒温水浴锅或金属浴中进行ERA‑CRISPR/Cas12a一锅法反应，在crRNA引导序列介导下，Lb Cas12a酶与crRNA、靶标DNA结合形成三元复合物后，激活cas12a的反式剪切活性，可任意切割反应体系中的ssDNA荧光探针以释放该探针上的荧光集团，用紫外灯检测荧光信号或用胶体金试纸条检测FAM及Biotin基团是否被切下进行结果判定。本发明快速检测鸡滑液囊支原体的ERA‑CRISPR/cas12a一锅法技术，通过ERA扩增及CRISPR/cas12a特异性识别鸡滑液囊支原体DNA靶标并切割，特异性强，检测灵敏度低至3.81pg/μL，可用于现场快速检测临床样品中的鸡滑液囊支原体。
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公开(公告)号：CN115044685A
公开(公告)日：2022-09-13
申请号：CN202110250999.5
申请日：2021-03-08
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12Q1/10 , C12Q1/14 , C12Q1/04 , C12R1/19 , C12R1/01 , C12R1/145 , C12R1/445
Abstract: 本发明属于生物医药领域，提供了一种检测多种食源性致病菌相关病原体的引物组，所述检测多种食源性致病菌相关病原体的引物组包括以下基因的引物：肠出血性大肠杆菌O157:H7特异性的保守基因rfbE、stx1、stx2、eaeA；单增李斯特菌特异性的保守基因actA；金黄色葡萄球菌特异性的保守基因nuc；产气荚膜梭菌特异性的肠毒素cpe；空肠弯曲菌特异性的保守基因hipO。本发明还提供了相应的试剂盒、应用和检测方法。本发明的检测方法操作简单、检测速度快、现场可视，且具有灵敏性高、特异性强等特点，适用于多种食源性致病菌病原的快速精准检测。
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公开(公告)号：CN110734992A
公开(公告)日：2020-01-31
申请号：CN201911180875.3
申请日：2019-11-27
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种食源性小肠结肠炎耶尔森菌的LAMP检测试剂盒，该试剂盒包含特异性针对食源性小肠结肠炎耶尔森菌ail基因设计的引物，所述引物包括SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3、以及SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5。本发明还公开了上述LAMP检测试剂盒的应用，用于对食品进行食源性小肠结肠炎耶尔森菌的检测。本发明食源性小肠结肠炎耶尔森菌的LAMP检测试剂盒，检测灵敏度可达2.8×102CFU/mL，比普通PCR高1000倍，而且还具有特异性好、结果可视等优点，适用于食品安全监测现场基层实时、快速、准确地检测小肠结肠炎耶尔森菌。
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