公开(公告)号：CN119710048A

公开(公告)日：2025-03-28

申请号：CN202411980863.X

申请日：2024-12-31

Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)

Inventor： 胡青海 ,  张行雨 ,  王诗琪 ,  郑雨婷 ,  王佳玲 ,  张笑莹 ,  廖洪艳

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开了基于ERA‑CRISPR/Cas12a一步法快速检测鸡滑液囊支原体的试剂盒、应用及方法，本发明的可视化检测试剂盒，是基于鸡滑液囊支原体新的核酸检测靶标scpA，待检样品先用裂解buffer裂解释放基因组DNA后，在恒温水浴锅或金属浴中进行ERA‑CRISPR/Cas12a一锅法反应，在crRNA引导序列介导下，Lb Cas12a酶与crRNA、靶标DNA结合形成三元复合物后，激活cas12a的反式剪切活性，可任意切割反应体系中的ssDNA荧光探针以释放该探针上的荧光集团，用紫外灯检测荧光信号或用胶体金试纸条检测FAM及Biotin基团是否被切下进行结果判定。本发明快速检测鸡滑液囊支原体的ERA‑CRISPR/cas12a一锅法技术，通过ERA扩增及CRISPR/cas12a特异性识别鸡滑液囊支原体DNA靶标并切割，特异性强，检测灵敏度低至3.81pg/μL，可用于现场快速检测临床样品中的鸡滑液囊支原体。

公开(公告)号：CN119710049A

公开(公告)日：2025-03-28

申请号：CN202411980954.3

申请日：2024-12-31

Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)

Inventor： 胡青海 ,  张行雨 ,  王诗琪 ,  郑雨婷 ,  王佳玲 ,  张笑莹 ,  廖洪艳

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开了基于ERA‑CRISPR/Cas12a一步法快速检测鸡毒支原体的试剂盒、应用及方法，本发明的鸡毒支原体可视化检测试剂盒，是基于鸡毒支原体新的核酸检测靶标hmpG1，待检样品先用裂解buffer裂解释放基因组DNA后，在恒温水浴锅或金属浴中进行ERA‑CRISPR/Cas12a一锅法反应，在crRNA引导序列介导下，Lb Cas12a酶与crRNA、靶标DNA结合形成三元复合物后，会激活cas12a的反式剪切活性，可任意切割反应体系中的ssDNA荧光探针以释放该探针上的荧光集团，然后用紫外灯检测荧光信号或用胶体金试纸条检测FAM及Biotin基团是否被切下进行结果判定。本发明快速检测鸡毒支原体的ERA‑CRISPR/cas12a一锅法技术，通过ERA扩增及CRISPR/cas12a特异性识别鸡毒支原体DNA靶标并切割，特异性强，检测灵敏度低至1.73pg/μL，可用于现场快速检测临床样品中的鸡毒支原体。