公开(公告)号：CN116837125A

公开(公告)日：2023-10-03

申请号：CN202311039454.5

申请日：2023-08-17

Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)

Inventor： 胡青海 ,  高永恒 ,  刘光清 ,  王佳玲 ,  苗怡钦 ,  张颖 ,  张笑莹

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12N15/113 ,  C12Q1/6804 ,  C12R1/63

Abstract: 本发明涉及一种基于LAMP‑CRISPR/Cas12b一体化体系快速检测副溶血性弧菌的试剂盒及其方法，包括LAMP引物、sgRNA引导序列、Cas12b酶和ssDNA荧光探针。本发明具有如下优点：可视化检测副溶血性弧菌的试剂盒通过先对待测样品进行LAMP扩增，sgRNA引导序列介导下，引导CRISPR‑Cas12b体系对LAMP扩增产物进行识别结合并切割目标双链DNA，并激活非特异性核酸酶功能，然后任意切割体系中的ssDNA荧光探针得到剪切产物，最后通过检测剪切产物的荧光信号，或用胶体金试纸条可视化检测反应体系中是否存在切下的FAM基团进行判断。本发明检测副溶血性弧菌的LAMP‑CRISPR/cas12b技术，通过LAMP扩增及sgRNA识别双重特异地对检测副溶血性弧菌进行检测，特异性强，且在灵敏度上可低至37CFU/mL，可现场快速检测到食品上污染的副溶血性弧菌。