公开(公告)号：CN118956961A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202411428497.7

申请日：2024-10-14

Applicant: 中国农业大学三亚研究院

Inventor： 吴森 ,  杜旭光 ,  段小月 ,  郭亮 ,  杜唱 ,  侯乃鹏 ,  陈超磊

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种用于分离多基因纯合编辑细胞的报告质粒和筛选方法。报告质粒包括目标区域靶位点插入序列和携带荧光蛋白的报告基因的质粒骨架；目标区域靶位点插入序列在报告基因的起始密码子后插入；目标区域靶位点插入序列包括：需同时编辑的所有基因或所有目标区域靶位点序列中打靶效率最低的目标区域靶位点序列，以及目标区域靶位点插入序列的序列长度为非3的倍数、且不含起始密码子和终止密码子。筛选方法的步骤包括：将基因编辑质粒以及报告质粒共转染入目的细胞；转染后，分选出阳性细胞群，得到同时编辑的多基因纯合编辑细胞。本发明的目的是解决现有技术无法从目的细胞中有效分离出多基因编辑细胞问题。