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公开(公告)号：CN109954017A
公开(公告)日：2019-07-02
申请号：CN201910345499.2
申请日：2019-04-26
Applicant: 中南民族大学
Abstract: 本发明提供了一种垂盆草提取物的制备方法以及在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的用途，所述垂盆草提取物包括垂盆草乙醇提取物、垂盆草石油醚提取物、垂盆草乙酸乙酯提取物、垂盆草正丁醇提取物以及经提取分离后剩余的水相浓缩物中的至少一种。本申请通过对实验小鼠离体气管环肌张力的检测以及气道平滑肌细胞内Ca2+检测，发现垂盆草提取物是具有高效的舒张气道平滑肌作用的药物，且这一舒张作用是由于阻断了LVDCCs以及激活BKCa等钙离子通道所致。以上的研究成果可证实垂盆草提取物具有缓解哮喘患者气道阻塞的能力，能够用于制备舒张气道平滑肌的药物中。
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公开(公告)号：CN105362362B
公开(公告)日：2019-08-20
申请号：CN201510817790.7
申请日：2015-11-20
Applicant: 中南民族大学
IPC: A61K36/704 , A61P11/06 , A61P37/02 , A61P29/00 , A61K127/00 , A61K135/00
Abstract: 本发明公开了一种萹蓄乙酸乙酯提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)、选取干燥的萹蓄茎叶磨成粉末；(2)、将粉末以乙醇浸泡并加热回流提取，收集提取液，蒸干，得到提取物；(3)、将提取物溶解于水中，用石油醚萃取，分别收集上层石油醚部萃取液和水部溶液，上层石油醚部萃取液蒸干后制得萹蓄石油醚提取物；(4)、将水部溶液用乙酸乙酯萃取，分别收集上层萃取液和下层水相部分，上层萃取液蒸干后制得为萹蓄乙酸乙酯提取物；(5)、将下层水相部分继续以正丁醇萃取，收集萃取液并蒸干后制得浸膏，即萹蓄正丁醇提取物。萹蓄乙酸乙酯提取物具有有效的气管平滑肌舒张作用，有望应用于缓解哮喘患者气道阻塞。
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公开(公告)号：CN108504657B
公开(公告)日：2019-06-14
申请号：CN201810325470.3
申请日：2018-04-12
Applicant: 中南民族大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12N5/10
Abstract: 本发明提供了一种CRISPR‑CAS9技术敲除HEK293T细胞KDM2A基因的方法，步骤如下：(1)、细胞转染；(2)、细胞基因组提取；(3)、PCR鉴定；(4)、基因水平验证；(5)、蛋白水平验证：在基因水平验证突变细胞株后，用蛋白质免疫印迹(Western blotting)进一步验证K3、K7‑1和K7‑2是KDM2A基因缺陷型。本发明还同时提供了利用上述方法制备的KDM2A基因敲除的HEK293T细胞系及以其作为细胞模型在研究KDM2A甲基化酶所涉及的细胞增殖和凋亡信号通路中的应用。
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公开(公告)号：CN112691126A
公开(公告)日：2021-04-23
申请号：CN202110096872.2
申请日：2021-01-25
Applicant: 中南民族大学
Abstract: 本发明公开了长松萝提取物在制备舒张气道平滑肌药物中的应用，本发明以高钾和乙酰胆碱刺激气道平滑肌的收缩来模拟气道高反应，并利用长松萝提取物进行干预，首次发现了长松萝提取物对于气道收缩的干预作用，并研究了其具体的药理学机制，即长松萝提取物通过阻断L型电压依赖性钙通道(LVDCCs)中的Ca2+内流、激活大电导钙激活钾离子通道(BKCa)中Ca2+外流、抑制Na+/Ca2+交换有效达到舒张气道平滑肌的作用，因此可将其用于治疗由气道平滑肌收缩所致的疾病，如哮喘、慢性阻塞性肺病等呼吸性疾病，可有效缓解气道平滑肌收缩导致的气管阻塞。
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公开(公告)号：CN105362362A
公开(公告)日：2016-03-02
申请号：CN201510817790.7
申请日：2015-11-20
Applicant: 中南民族大学
IPC: A61K36/704 , A61P11/06 , A61P37/02 , A61P29/00 , A61K127/00 , A61K135/00
Abstract: 本发明公开了一种萹蓄乙酸乙酯提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)、选取干燥的萹蓄茎叶磨成粉末；(2)、将粉末以乙醇浸泡并加热回流提取，收集提取液，蒸干，得到提取物；(3)、将提取物溶解于水中，用石油醚萃取，分别收集上层石油醚部萃取液和水部溶液，上层石油醚部萃取液蒸干后制得萹蓄石油醚提取物；(4)、将水部溶液用乙酸乙酯萃取，分别收集上层萃取液和下层水相部分，上层萃取液蒸干后制得为萹蓄乙酸乙酯提取物；(5)、将下层水相部分继续以正丁醇萃取，收集萃取液并蒸干后制得浸膏，即萹蓄正丁醇提取物。萹蓄乙酸乙酯提取物具有有效的气管平滑肌舒张作用，有望应用于缓解哮喘患者气道阻塞。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111012814A
公开(公告)日：2020-04-17
申请号：CN202010017584.9
申请日：2020-01-08
Applicant: 中南民族大学
Abstract: 本发明公开了千里光提取物在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的应用；本发明研究发现，通过对实验小鼠离体气管环肌张力的检测，发现千里光提取物是具有高效的舒张气道平滑肌作用的药物，这说明千里光是开发用于预防和治疗哮喘高效新药的一个来源，可应用于缓解哮喘患者发作时气道阻塞的症状。且本发明研究发现所述千里光提取物通过阻断LVDCC离子通道或NSCCs离子通道中的至少一种来抑制钙离子内流以舒张预收缩的气道平滑肌。
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公开(公告)号：CN110169963A
公开(公告)日：2019-08-27
申请号：CN201910562115.2
申请日：2019-06-26
Applicant: 中南民族大学
IPC: A61K31/192 , A61P11/06 , A61P11/00
Abstract: 本发明属于医药技术技术领域，尤其涉及对香豆酸作为制备用于舒张气道平滑肌的药物的应用。本发明发现了对香豆酸在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的应用，发现了对香豆酸对高钾和乙酰胆碱刺激气管平滑肌的收缩具有显著的干预作用，能用于哮喘等呼吸性疾病治疗；本发明通过对实验小鼠离体气管环肌张力的检测以及气道平滑肌细胞内Ca2+检测，发现对香豆酸具有缓解哮喘患者气道阻塞的能力，且这一舒张作用是由于阻断LVDCCs和NSCCs离子通道来抑制钙离子内流，同时激活BKCa离子通道所致。对香豆酸在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的应用是对香豆酸的新用途，该新用途具有重要意义。
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公开(公告)号：CN108823205A
公开(公告)日：2018-11-16
申请号：CN201810600701.7
申请日：2018-06-12
Applicant: 中南民族大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12N5/10
Abstract: 本发明提供了一种敲除PLAC8基因的HEK293T细胞系构建方法，步骤如下：(1)、sgRNA设计；(2)、重组质粒构建；(3)、细胞转染；(4)、流式细胞术分选阳性细胞；(5)、单细胞培养；(6)、测序检测。本发明利用改进型的CRISPR/Cas9系统从HEK293T细胞中敲除PLAC8基因，操作简便，效果完整而彻底，与HEK293T细胞特性一起构成了理想的细胞模型，用于研究细胞内表观遗传学的改变。本发明还突破了构建敲除细胞系过程中的转染效率低及慢病毒包装两个瓶颈，提供了一种简便高效的构建敲减细胞系的方法。
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公开(公告)号：CN108504657A
公开(公告)日：2018-09-07
申请号：CN201810325470.3
申请日：2018-04-12
Applicant: 中南民族大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12N5/10
CPC classification number: C12N15/113 , C12N5/0603 , C12N5/0686 , C12N9/0071 , C12N9/22 , C12N15/85 , C12N15/907 , C12N2310/10 , C12N2510/00 , C12Y114/11027
Abstract: 本发明提供了一种CRISPR-CAS9技术敲除HEK293T细胞KDM2A基因的方法，步骤如下：(1)、细胞转染；(2)、细胞基因组提取；(3)、PCR鉴定；(4)、基因水平验证；(5)、蛋白水平验证：在基因水平验证突变细胞株后，用蛋白质免疫印迹(Western blotting)进一步验证K3、K7-1和K7-2是KDM2A基因缺陷型。本发明还同时提供了利用上述方法制备的KDM2A基因敲除的HEK293T细胞系及以其作为细胞模型在研究KDM2A甲基化酶所涉及的细胞增殖和凋亡信号通路中的应用。
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公开(公告)号：CN107236763A
公开(公告)日：2017-10-10
申请号：CN201710494777.1
申请日：2017-06-26
Applicant: 中南民族大学
CPC classification number: C12N15/85 , C07K14/43595
Abstract: 本发明提供了一种基于流式细胞术的构建基因敲除细胞系的方法，包括以下步骤：(1)、细胞系的转染：构建带有GFP的序列的PX458‑sgRNA重组质粒，然后将PX458‑sgRNA重组质粒用lipo3000转染到细胞中，使细胞带上绿色荧光；(2)、流式细胞术分选阳性细胞：然后利用流式细胞仪将带绿色荧光的细胞分选为单细胞；(3)、单细胞培养：将分选后的带有绿色荧光的单细胞用细胞培养板进行培养；(4)、测序检测：将培养完毕后的细胞提取基因组并测序，筛选出基因敲除后的细胞系。本发明中解决了现有技术中构建敲除细胞系过程中的转染效率及慢病毒包装两个瓶颈，更为简便、省时。
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