公开(公告)号：CN107236763A

公开(公告)日：2017-10-10

申请号：CN201710494777.1

申请日：2017-06-26

Applicant: 中南民族大学

Inventor： 薛璐 ,  欧阳聪 ,  周婉 ,  刘庆华 ,  沈金花 ,  彭勇波 ,  赵平 ,  马立群 ,  于孟飞 ,  陈微微

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/12

CPC classification number: C12N15/85 ,  C07K14/43595

Abstract: 本发明提供了一种基于流式细胞术的构建基因敲除细胞系的方法，包括以下步骤：(1)、细胞系的转染：构建带有GFP的序列的PX458‑sgRNA重组质粒，然后将PX458‑sgRNA重组质粒用lipo3000转染到细胞中，使细胞带上绿色荧光；(2)、流式细胞术分选阳性细胞：然后利用流式细胞仪将带绿色荧光的细胞分选为单细胞；(3)、单细胞培养：将分选后的带有绿色荧光的单细胞用细胞培养板进行培养；(4)、测序检测：将培养完毕后的细胞提取基因组并测序，筛选出基因敲除后的细胞系。本发明中解决了现有技术中构建敲除细胞系过程中的转染效率及慢病毒包装两个瓶颈，更为简便、省时。