公开(公告)号：CN112877367A

公开(公告)日：2021-06-01

申请号：CN202110194117.8

申请日：2021-02-20

Applicant: 东南大学

Inventor： 柴人杰 ,  蔡嘉颖 ,  张莎莎 ,  程诚 ,  高下

IPC: C12N15/87 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N5/074

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体的是Gpm6b调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。分化方法的步骤：OC‑1细胞培养；siRNA敲低Gpm6b基因，采用N1301、N885、N1082三种不同的siRNA敲减OC‑1细胞中的Gpm6b基因；Lgr5+祖细胞的分离培养及Gpm6b基因敲低，Lgr5+祖细胞消化成单细胞后，采用流式细胞分选技术进行分选，经培养后再Gpm6b基因敲低；Gpm6b基因敲低对Lgr5+祖细胞增殖/分化的影响，采用细胞成球实验、EdU染色实验和免疫荧光实验研究Gpm6b基因敲减对Lgr5+细胞增殖/分化的影响，再评估Lgr5+细胞增殖、分化为毛细胞的能力；数据分析，采用GraphPadPrism 6进行数据统计分析。本发明敲低Gpm6b基因后对于Lgr5+细胞成球有抑制作用，即Gpm6b敲低抑制Lgr5+细胞增殖。而Gpm6b基因敲减对Lgr5+细胞分化再生毛细胞无调控作用。