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公开(公告)号：CN119120372A
公开(公告)日：2024-12-13
申请号：CN202411439467.6
申请日：2024-10-15
IPC: C12N5/079
Abstract: 本发明公开了一种耳蜗组织小细胞外囊泡的富集方法，属于生物学领域。该方法包括以下步骤：将所述耳蜗组织的基底膜、螺旋韧带与蜗轴放入培养皿中培养，并切块；加入酶进行消化处理；消化后的耳蜗通过超速离心法、蔗糖密度梯度法或者尺寸排阻法处理，分离获得耳蜗组织小细胞外囊泡。本发明的目的是为了解决在内耳组织提取富集sEV的技术问题，本发明提出一种提取富集内耳组织sEV的方法，为深入研究sEV在听觉系统中作用提供sEV的分离纯化方法。本发明通过对文献中其他组织sEVs提取富集方式的改变获得了最优适用于内耳组织sEVs的提取方式。本发明将在一定程度上促进听觉领域中sEVs的研究。
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公开(公告)号：CN113151286A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110168127.4
申请日：2021-02-07
Applicant: 东南大学
IPC: C12N15/12 , C12N15/861 , C12N5/10 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了Lgr5基因在保护内耳毛细胞及促进支持细胞再生上的应用。所述Lgr5的C端具有如SEQ NO.1所示的核苷酸序列，且N端的第190位具有编码丙氨酸的核苷酸序列。首先构建了Lgr5、Lgr5‑C（Lgr5上823位氨基酸后全部截断）和Lgr5‑190（Lgr5上190位氨基酸由丙氨酸变为天冬氨酸）的腺病毒，分别探究Lgr5基因的C末端和N末端对毛细胞的保护作用和内耳干细胞的再生作用，最后分别研究Lgr5基因的C末端和N末端在内耳中的作用机制，从而确定Lgr5基因对毛细胞的保护和支持细胞再生为毛细胞的作用机制，为治疗耳聋提供新的理论思路，代替助听器和人工耳蜗帮助患者恢复和重建听觉功能。
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公开(公告)号：CN112941013A
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN202110193781.0
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
Abstract: 本发明公开了一种Net1基因细胞模型的构建方法与应用，属于生物技术领域。一种Net1基因细胞模型的构建方法，包括以下步骤：步骤1：培养OC‑1细胞，用siRNA敲减所述OC‑1细胞中的Net1基因，检测敲减效率；步骤2：Lgr5‑EGFP小鼠耳蜗，消化成单细胞后，分选出表达Lgr5细胞，在细胞培养皿中培养；通过siRNA敲除所述表达Lgr5细胞中的Net1基因；步骤3：进行细胞成球试验，观察并量化球形的数量和直径来评估所述表达Lgr5细胞的增殖、分化能力。
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公开(公告)号：CN112881711A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110193885.1
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
IPC: G01N33/68 , C12Q1/6851 , A61K49/00
Abstract: 本发明公开了一种基于调控信号通路的小鼠模型的构建方法及其应用，属于生物技术领域。一种小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：构建β‑catenin敲除、Notch1敲除、以及两者双敲除的小鼠模型。在鼠龄为0或1天的时候，注射tamoxifen与EdU，鼠龄为7天时，解剖所述小鼠的基底膜进行免疫荧光实验，用myosin7a抗体标记毛细胞，用Sox2抗体标记支持细胞，并且对EdU+Sox2与EdU+Myo7a均阳性的细胞进行计数统计；分别分离野生型对照组、β‑catenin过表达(β‑cat OE)、Notch1‑KO以及β‑cat OE/Notch1‑KO鼠龄7天天小鼠基底膜，分别提取其RNA进行测序。
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公开(公告)号：CN112870383A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110194456.6
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体的是Hippo调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。Hippo调控内耳干细胞增殖分化方法，包括以下步骤；一、在野生型小鼠中检测Hippo信号通路成员在耳蜗中的表达情况；二、在离体实验中研究Hippo信号对流式分选出的内耳干细胞增殖分化的调控机制；三、在离体实验中研究Hippo和Wnt信号对内耳干细胞的协同调控机制等。本发明使用Lgr5‑EGFP‑CreERT2工具鼠可使得内耳干细胞(Lgr5阳性细胞)的分离准确且大量，可达到较好的研究前提：分选出的小鼠Lgr5阳性内耳干细胞。此外，在离体实验中研究Hippo信号通路对分选出的内耳干细胞进行成球和分化实验后，可以深入探究Hippo信号通路在调控内耳干细胞增殖/分化及毛细胞再生中的具体作用机制。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112831500A
公开(公告)日：2021-05-25
申请号：CN202110194101.7
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
IPC: C12N15/113 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种Dkk3基因小鼠模型的构建方法与应用，属于生物技术领域。一种Dkk3基因小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：步骤1：培养OC‑1细胞；用siRNA敲减所述OC‑1细胞中的Dkk3基因，检测敲减效率；步骤2：取新生Lgr5‑EGFP小鼠耳蜗，消化成单细胞；从所述Lgr5‑EGFP细胞悬液中分选出Lgr5+细胞；步骤3：OC‑1细胞中敲低效率最佳的siRNA敲低Lgr5+细胞中的Dkk3基因；步骤4：进行细胞成球试验，观察并量化球形的数量和直径来评估Lgr5+细胞的增殖能力。
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公开(公告)号：CN112831500B
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202110194101.7
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
IPC: C12N15/113 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种Dkk3基因小鼠模型的构建方法与应用，属于生物技术领域。一种Dkk3基因小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：步骤1：培养OC‑1细胞；用siRNA敲减所述OC‑1细胞中的Dkk3基因，检测敲减效率；步骤2：取新生Lgr5‑EGFP小鼠耳蜗，消化成单细胞；从所述Lgr5‑EGFP细胞悬液中分选出Lgr5+细胞；步骤3：OC‑1细胞中敲低效率最佳的siRNA敲低Lgr5+细胞中的Dkk3基因；步骤4：进行细胞成球试验，观察并量化球形的数量和直径来评估Lgr5+细胞的增殖能力。
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公开(公告)号：CN115885929A
公开(公告)日：2023-04-04
申请号：CN202211428434.2
申请日：2022-11-15
Applicant: 东南大学
IPC: A01K67/027 , C12N15/85 , C12N15/12
Abstract: 本发明公开过表达Rassf2基因调控内耳毛细胞增殖的应用，属于生物技术领域，包括一种Rassf2基因小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：步骤一：构建Rassf2loxp/loxp过表达小鼠和Lgr5Cre/ER小鼠；步骤二：再将Rassf2loxp/loxp与Lgr5Cre/ER小鼠交配；步骤三：获得新生的Rassf2loxp/loxpLgr5Cre/ER小鼠，并在出生后的第一天激活Cre酶表达，出生后第七天收取小鼠基底膜；步骤四：在将基底膜三个部分，分别进行免疫荧光染色，标记毛细胞，染色后进行拍摄，最后对增多毛细胞进行统计。本发明的发明目的是通过在小鼠内耳支持细胞中特异性的过表达Rassf2基因来促进内耳干细胞增殖，从而为临床中改善听力损失提供理论基础。
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公开(公告)号：CN112877413A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110194497.5
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
IPC: C12Q1/6876 , G01N33/68 , C12N15/12 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及内耳干细胞领域，具体的是Rassf2调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。调控方法，包括以下步骤：一、在野生型小鼠中检测Shh或Hippo和Rassf2在耳蜗中的表达情况；二、在离体实验中研究Shh或Hippo和Rassf2对流式分选出的内耳干细胞增殖分化的作用；三、在活体毛细胞新霉素损伤模型上，研究Shh或Hippo和Rassf2的作用。本发明使用Lgr5‑EGFP‑CreERT2工具鼠可使得内耳干细胞(Lgr5阳性细胞)的分离准确且大量，可达到较好的研究前提：分选出的小鼠Lgr5阳性内耳干细胞。此外，在离体实验中研究Shh、Hippo和Rassf2对分选出的内耳干细胞进行成球和分化实验后，可以深入探究Shh、Hippo和Rassf2在调控内耳干细胞增殖分化及毛细胞再生中的具体作用机制。
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公开(公告)号：CN112877367A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110194117.8
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体的是Gpm6b调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。分化方法的步骤：OC‑1细胞培养；siRNA敲低Gpm6b基因，采用N1301、N885、N1082三种不同的siRNA敲减OC‑1细胞中的Gpm6b基因；Lgr5+祖细胞的分离培养及Gpm6b基因敲低，Lgr5+祖细胞消化成单细胞后，采用流式细胞分选技术进行分选，经培养后再Gpm6b基因敲低；Gpm6b基因敲低对Lgr5+祖细胞增殖/分化的影响，采用细胞成球实验、EdU染色实验和免疫荧光实验研究Gpm6b基因敲减对Lgr5+细胞增殖/分化的影响，再评估Lgr5+细胞增殖、分化为毛细胞的能力；数据分析，采用GraphPadPrism 6进行数据统计分析。本发明敲低Gpm6b基因后对于Lgr5+细胞成球有抑制作用，即Gpm6b敲低抑制Lgr5+细胞增殖。而Gpm6b基因敲减对Lgr5+细胞分化再生毛细胞无调控作用。
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