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公开(公告)号：CN113273545B
公开(公告)日：2022-08-16
申请号：CN202110194377.5
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
IPC: C12N15/12
Abstract: 本发明公开了一种GPA、Espin、Ikzf2小鼠模型的构建方法，属于生物技术领域。一种GPA、Espin、Ikzf2小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：生成Lgr5‑CreER阳性、GPA阳性且tdTomato阳性小鼠，使GPA在表达Lgr5的耳蜗支持细胞中特异性表达，在小鼠鼠龄到达3天和4天时，给小鼠注射他莫昔芬，在鼠龄10天时解剖耳蜗；对Myo7a阳性、tdTomato阳性细胞进行标记，并统计其数量；鉴定小鼠耳蜗中的毛细胞生成情况。
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公开(公告)号：CN112175923B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202011060861.0
申请日：2020-09-30
Applicant: 东南大学
Abstract: 本发明属于生物学内耳研究领域，具体公开了一种生物因子及其在促进内耳毛细胞再生上的应用。所述生物因子为单倍剂量状态下的组蛋白去泛素化酶USP16，所述生物因子具有促进内耳干细胞增殖分化为毛细胞的活性，氨基酸序列如SEQ NO.1所示。本发明人首次在内耳中发现USP16在小鼠内耳中的时空表达模式；后续发现该基因在小鼠毛细胞中敲低之后会导致毛细胞凋亡进而影响正常的听觉功能；最后发现在内耳Lgr5阳性内耳干细胞中敲低USP16基因后促进了内耳干细胞的增殖，导致了毛细胞的增生情况。本发明所述USP16基因为后续小鼠毛细胞再生的研究中奠定了重要基础。
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公开(公告)号：CN113273545A
公开(公告)日：2021-08-20
申请号：CN202110194377.5
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
IPC: A01K67/027 , C12N15/85 , C12N15/12
Abstract: 本发明公开了一种GPA、Espin、Ikzf2小鼠模型的构建方法，属于生物技术领域。一种GPA、Espin、Ikzf2小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：生成Lgr5‑CreER阳性、GPA阳性且tdTomato阳性小鼠，使GPA在表达Lgr5的耳蜗支持细胞中特异性表达，在小鼠鼠龄到达3天和4天时，给小鼠注射他莫昔芬，在鼠龄10天时解剖耳蜗；对Myo7a阳性、tdTomato阳性细胞进行标记，并统计其数量；鉴定小鼠耳蜗中的毛细胞生成情况。
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公开(公告)号：CN112899278A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110194253.7
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
IPC: C12N15/113 , C12Q1/686
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体的是Rps14和Foxg1调控内耳干细胞增殖分化方法及其应用，方法包括：一、Rps14基因对Lgr5+内耳干细胞增殖和分化的调控：1、OC‑1细胞培养；2、siRNA敲除Rps14基因；3、Lgr5+祖细胞的分离培养及Rps14基因敲除；4、Rps14基因敲除的Lgr5+祖细胞生物学效应，二、敲除Lgr5+祖细胞Foxg1对毛细胞增殖的影响。本发明将Lgr5‑EGFP‑CreERT2小鼠与Foxg1‑floxp小鼠杂交，在Lgr5+祖细胞中有条件地敲除Foxg1，发现Lgr5+祖细胞中敲除Foxg1能诱导新生小鼠耳蜗产生额外的IHCs。通过OC‑1细胞利用不同siRNA敲除Rps14基因，RT‑qPCR检测转染效果；分离培养Lgr5+内耳干细胞转染后检测增殖及分化，通过Lgr5+干细胞上进行成球分化实验表明敲减Rps14基因会抑制干细胞的增殖，对分化无影响。
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公开(公告)号：CN113230410A
公开(公告)日：2021-08-10
申请号：CN202110648054.9
申请日：2021-06-10
Applicant: 东南大学
IPC: A61K45/06 , A61K31/4412 , A61K31/7036 , A61K31/702 , A61K31/7048 , A61P27/16 , A01K67/02
Abstract: 本发明公开了去铁酮在抑制氨基糖苷类药物的耳毒性中的应用，属于药物性耳聋领域。本发明公开了去铁酮(DFP)在保护氨基糖苷类药物引起的听力损失中的应用。所述的DFP是唯一口服有活性的铁螯合剂，临床用于治疗地中海贫血中的输血性铁过载。本发明首先研究了氨基糖苷类药物损伤，类毛细胞HEI‑OC1以及体外培养耳蜗组织中线粒体自噬发生水平，并在体外培养耳蜗组织上探究DFP调节线粒体自噬对毛细胞的保护作用，最后研究DFP对氨基糖苷类药物引起小鼠听力损失的保护作用，为治疗药物性耳聋提供新思路，为临床帮助患者恢复和重建听觉功能提供新靶点。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112831500A
公开(公告)日：2021-05-25
申请号：CN202110194101.7
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
IPC: C12N15/113 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种Dkk3基因小鼠模型的构建方法与应用，属于生物技术领域。一种Dkk3基因小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：步骤1：培养OC‑1细胞；用siRNA敲减所述OC‑1细胞中的Dkk3基因，检测敲减效率；步骤2：取新生Lgr5‑EGFP小鼠耳蜗，消化成单细胞；从所述Lgr5‑EGFP细胞悬液中分选出Lgr5+细胞；步骤3：OC‑1细胞中敲低效率最佳的siRNA敲低Lgr5+细胞中的Dkk3基因；步骤4：进行细胞成球试验，观察并量化球形的数量和直径来评估Lgr5+细胞的增殖能力。
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公开(公告)号：CN112194717A
公开(公告)日：2021-01-08
申请号：CN202011059153.5
申请日：2020-09-30
Applicant: 东南大学
Abstract: 本发明公开了一种促进耳蜗毛细胞再生的肽段Tr及其应用。本发明通过复制肽段Tr，并构建Anc80L65‑Tr病毒，将Anc80L65‑Tr病毒注射进入P2幼鼠的内耳一个月后，小鼠的内毛细胞附近出现了新生毛细胞，且SEM数据表明，这些新生的毛细胞表现出一定的内毛细胞的形态特征。新生毛细胞表面有成束的静纤毛，部分细胞表面的静纤毛呈现阶梯状排列，肽段Tr具有促进毛细胞再生的功能。这一发现为感音神经性聋找到新的治疗方向，为替代人工耳蜗实现真正意义上听觉功能的恢复，具有巨大的临床潜在应用价值。
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公开(公告)号：CN112194717B
公开(公告)日：2021-12-14
申请号：CN202011059153.5
申请日：2020-09-30
Applicant: 东南大学
Abstract: 本发明公开了一种促进耳蜗毛细胞再生的肽段Tr及其应用。本发明通过复制肽段Tr，并构建Anc80L65‑Tr病毒，将Anc80L65‑Tr病毒注射进入P2幼鼠的内耳一个月后，小鼠的内毛细胞附近出现了新生毛细胞，且SEM数据表明，这些新生的毛细胞表现出一定的内毛细胞的形态特征。新生毛细胞表面有成束的静纤毛，部分细胞表面的静纤毛呈现阶梯状排列，肽段Tr具有促进毛细胞再生的功能。这一发现为感音神经性聋找到新的治疗方向，为替代人工耳蜗实现真正意义上听觉功能的恢复，具有巨大的临床潜在应用价值。
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公开(公告)号：CN113151286A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110168127.4
申请日：2021-02-07
Applicant: 东南大学
IPC: C12N15/12 , C12N15/861 , C12N5/10 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了Lgr5基因在保护内耳毛细胞及促进支持细胞再生上的应用。所述Lgr5的C端具有如SEQ NO.1所示的核苷酸序列，且N端的第190位具有编码丙氨酸的核苷酸序列。首先构建了Lgr5、Lgr5‑C（Lgr5上823位氨基酸后全部截断）和Lgr5‑190（Lgr5上190位氨基酸由丙氨酸变为天冬氨酸）的腺病毒，分别探究Lgr5基因的C末端和N末端对毛细胞的保护作用和内耳干细胞的再生作用，最后分别研究Lgr5基因的C末端和N末端在内耳中的作用机制，从而确定Lgr5基因对毛细胞的保护和支持细胞再生为毛细胞的作用机制，为治疗耳聋提供新的理论思路，代替助听器和人工耳蜗帮助患者恢复和重建听觉功能。
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公开(公告)号：CN112941013A
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN202110193781.0
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
Abstract: 本发明公开了一种Net1基因细胞模型的构建方法与应用，属于生物技术领域。一种Net1基因细胞模型的构建方法，包括以下步骤：步骤1：培养OC‑1细胞，用siRNA敲减所述OC‑1细胞中的Net1基因，检测敲减效率；步骤2：Lgr5‑EGFP小鼠耳蜗，消化成单细胞后，分选出表达Lgr5细胞，在细胞培养皿中培养；通过siRNA敲除所述表达Lgr5细胞中的Net1基因；步骤3：进行细胞成球试验，观察并量化球形的数量和直径来评估所述表达Lgr5细胞的增殖、分化能力。
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