一种基于CRISPR-Cas9编辑技术的敲除鸡Shp-2基因的细胞系及其构建方法

    公开(公告)号:CN110684736A

    公开(公告)日:2020-01-14

    申请号:CN201910754620.7

    申请日:2019-08-15

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及到一种基于CRISPR-Cas9编辑技术的敲除鸡Shp-2基因的细胞系及其构建方法,本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向鸡Shp-2基因的sgRNA,然后将sgRNA克隆至带有Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒并将质粒转染至细胞中,利用CRISPR-Cas9系统达到基因沉默,通过药物筛选和亚克隆的方法最后获得阳性单克隆细胞株,从而获得鸡源Shp-2敲除的细胞系。本发明目的是构建一种基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡Shp-2基因的方法,及其靶向鸡Shp-2基因的sgRNA,以期获得鸡源Shp-2基因敲除的细胞模型,用于相关疾病的研究。本发明基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡Shp-2基因的细胞系构建在相关领域未见报道,本发明将填补国内外相关技术的空白,具有较大的应用研究价值。

    非洲猪瘟病毒P11.5蛋白特异性多克隆抗体的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN109836478A

    公开(公告)日:2019-06-04

    申请号:CN201910208025.3

    申请日:2019-03-19

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了非洲猪瘟病毒P11.5蛋白特异性多克隆抗体的制备方法及应用,该方法利用P11.5多肽表位免疫实验动物如小鼠、兔等制备特异性多克隆抗体。该方法抗原纯度高,制备的抗体特异性强,亲和力高,使用的抗原量少,操作简便。所述的多克隆抗体的制备方法包括ASFV P11.5的特异性抗原表位的选择,多肽抗原的合成,动物免疫,抗体的测定等步骤。与常规方法比较,具有简便快速,抗原纯度高,制备的抗体特异性强,抗原使用量少的优点。该多克隆抗体可以用于非洲猪瘟病毒P11.5蛋白检测,为我国非洲猪瘟的防控提供重要的技术方法。

    一种表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒的构建方法

    公开(公告)号:CN109295012A

    公开(公告)日:2019-02-01

    申请号:CN201811212808.0

    申请日:2018-10-18

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种构建表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒方法,具体为:设计PCR扩增ALV-J传染性克隆线性化表达载体引物以及PCR扩增ALV-K-env基因引物序列;PCR扩增ALV-K囊膜蛋白基因片段和ALV-J传染性克隆线性化载体,构建重组传染性克隆质粒,并将重组质粒转染DF-1细胞拯救出表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒。本发明利用ALV-J传染性克隆,构建了高效复制及表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒。这一重组病毒的获得不仅为研究ALV-K囊膜蛋白功能受体及其致病性打下了基础,更能够为临床检测ALV-K的中和抗体提供靶向病毒。

Patent Agency Ranking