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公开(公告)号：CN112410315A
公开(公告)日：2021-02-26
申请号：CN202011374947.0
申请日：2020-11-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种生产长链糖基化槐角苷的方法，属于酶工程以及发酵工程技术领域。本发明提供了一种生产长链糖基化槐角苷的方法，此方法中利用了环糊精葡萄糖基转移酶突变体S77N、Y195S、Y195I、S77N、S77N/Y195S以及S77N/Y195I，使得长链糖基化槐角苷含量显著提升，通过对反应条件的优化，将反应液中长链糖基化槐角苷的含量提高至9.8g/L，将反应液中长链糖基化槐角苷的含量占反应液中总糖基化槐角苷含量的比例提高至45％。
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公开(公告)号：CN111394328A
公开(公告)日：2020-07-10
申请号：CN202010299605.0
申请日：2020-04-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种产物特异性提高的环糊精葡萄糖基转移酶及制备方法，属于遗传工程和酶工程领域。本发明提供了3个染料木素糖基化效率高的环糊精葡萄糖基转移酶突变体L174P、L174Y和L174D，相比于野生型环糊精葡萄糖基转移酶，它们利用麦芽糊精为糖基供体生产糖基化染料木素时，长链糖基化染料木素合成产量分别提高了0.7、1.2和1.8倍，更利于糖基化染料木素的工业化生产。
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公开(公告)号：CN109486782B
公开(公告)日：2020-06-09
申请号：CN201811415908.3
申请日：2018-11-26
Applicant: 江南大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
Abstract: 本发明公开了一种分子伴侣共表达提高蔗糖磷酸化酶表达效率的方法，属于生物工程与酶工程技术领域。本发明通过将重组质粒pET‑20b‑SPase与pGro7共表达，使得pGro7表达的分子伴侣蛋白能够有效减少包涵体的形成，促进SPase可溶性表达水平和活力的提高。通过优化表达条件及使用分子伴侣共表达系统，SPase的胞内酶活达到了24.33U/mL，比酶活达到了6.58U/mg。
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公开(公告)号：CN108486080B
公开(公告)日：2020-06-09
申请号：CN201810303894.X
申请日：2018-04-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种环糊精葡萄糖基转移酶及其制备方法，属于遗传工程和酶工程领域。本发明通过对P.macerans strain JFB05‑01(CCTCC NO:M208063)的CGTase的156位的丙氨酸(Ala)分别替换为赖氨酸(Lys)、谷氨酰胺(Gln)和缬氨酸(Val)，使染料木素糖基化效率分别提高了23％、44％和32％。这些突变酶比野生型CGTase更利于催化生产糖基化染料木素。
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公开(公告)号：CN109486782A
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201811415908.3
申请日：2018-11-26
Applicant: 江南大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
Abstract: 本发明公开了一种分子伴侣共表达提高蔗糖磷酸化酶表达效率的方法，属于生物工程与酶工程技术领域。本发明通过将重组质粒pET-20b-SPase与pGro7共表达，使得pGro7表达的分子伴侣蛋白能够有效减少包涵体的形成，促进SPase可溶性表达水平和活力的提高。通过优化表达条件及使用分子伴侣共表达系统，SPase的胞内酶活达到了24.33U/mL，比酶活达到了6.58U/mg。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108486080A
公开(公告)日：2018-09-04
申请号：CN201810303894.X
申请日：2018-04-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种环糊精葡萄糖基转移酶及其制备方法，属于遗传工程和酶工程领域。本发明通过对P.macerans strain JFB05-01(CCTCC NO:M208063)的CGTase的156位的丙氨酸(Ala)分别替换为赖氨酸(Lys)、谷氨酰胺(Gln)和缬氨酸(Val)，使染料木素糖基化效率分别提高了23％、44％和32％。这些突变酶比野生型CGTase更利于催化生产糖基化染料木素。
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公开(公告)号：CN106755215A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201710014956.0
申请日：2017-01-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用环糊精葡萄糖基转移酶高产染料木素糖基化衍生物的方法，属于酶工程领域。本发明分别对环糊精葡萄糖基转移酶催化染料木素糖基化反应体系中的糖基供体种类，染料木素溶剂种类，底物浓度及配比，酶的浓度，以及反应温度、pH和时间进行了优化。分别以可溶性淀粉和染料木素作为糖基化供体和受体，以环糊精葡萄糖基转移酶作为催化剂，在最适反应条件下，糖基化染料木素产物的产量达到最大化，特别是对于主产物(Glc)2‑genistein，其产量较优化前提高了近1.5倍。
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公开(公告)号：CN106754604A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201710014828.6
申请日：2017-01-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用环糊精葡萄糖基转移酶转糖基反应提高染料木素水溶性的方法，属于酶工程领域。本发明将来源于P.macerans strain JFB05‑01(CCTCC NO:M208063)的环糊精葡萄糖基转移酶密码子优化后的基因(GenBank accession no.JX412224)连接至pET20b(+)质粒上，并转入E.coli BL21(DE3)细胞中构建产环糊精葡萄糖基转移酶的基因工程菌。通过发酵产酶并纯化后，获得较纯的环糊精葡萄糖基转移酶用于催化转糖基反应，并以α‑环糊精作为糖基供体，染料木素作为糖基受体，最终获得至少四种染料木素糖基化衍生物(Glc)n‑genistein(n＝1,2,3,4)。其中Glc‑genistein和(Glc)2‑genistein为主要产物，特别是(Glc)2‑genistein，其水溶性较染料木素有较大幅度提高。
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公开(公告)号：CN105950634A
公开(公告)日：2016-09-21
申请号：CN201610351243.9
申请日：2016-05-25
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C07K14/245 , C12N15/70 , C12N2800/101
Abstract: 本发明通过随机突变全局转录因子σ70编码基因rpoD筛选具有高丁醇耐受性的大肠杆菌菌株，属于生物工程技术领域。本发明采用随机突变法构建全局转录因子σ70编码基因rpoD的突变文库，筛选获得了一株携带σ70突变基因rpoDM2的大肠杆菌E.coli JM109/pHACMB8，可耐受2％(v/v)丁醇。本发明为具有高丁醇耐受性微生物菌株的构建提供了理论依据和有效方法。
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公开(公告)号：CN104073476B
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201410271634.0
申请日：2012-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种麦芽糊精底物特异性提高的环糊精糖基转移酶及其制备方法，属于遗传工程和酶工程领域。本发明通过对P.macerans strain JFB05-01(CCTCC NO:M208063)的CGTase的195位的酪氨酸(Tyr)替换为丝氨酸(Ser),260位的酪氨酸(Tyr)替换为精氨酸(Arg),265位的谷氨酰胺(Gln)替换为赖氨酸(Lys)，使AA-2G产量分别提高了23％，44％和40％。对以上突变株组合突变，获得双突变体Y195S/Y260R,Y195S/Q265K和Y260R/Q265K以及三点突变体Y195S/Y260R/Q265K。它们利用麦芽糊精为糖基供体生产AA-2G产量分别提高了57％，49％，55％和59％。这些突变株比野生型CGTase更利于利用麦芽糊精为糖基供体生产AA-2G。
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