公开(公告)号：CN110804577A

公开(公告)日：2020-02-18

申请号：CN201911188891.7

申请日：2019-11-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  李雯 ,  朱莺莺 ,  万李

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P19/18 ,  C12P19/12

Abstract: 本发明提供了一种生产2’-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌工程菌株，通过CRISPR/Cas9基因编辑系统，敲除原始菌株2’-岩藻糖基乳糖合成代谢途径中的相关基因；构建模块化代谢通路，通过不同质粒组合调控代谢途径中的磷酸甘露糖变位酶(ManB)，甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶(ManC)，GDP-甘露糖-6-脱氢酶(Gmd)，GDP-岩藻糖合成酶(WcaG)，L-岩藻糖1-激酶/GDP-岩藻糖焦磷酸化酶(Fkp)以及2’-岩藻糖基乳糖合成酶(FucT2)的表达水平，使细胞内能积累更高浓度的2’-岩藻糖基乳糖。本发明还提供了一种高效生产2’-岩藻糖基乳糖的方法。

公开(公告)号：CN110734889A

公开(公告)日：2020-01-31

申请号：CN201911092950.0

申请日：2019-11-11

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  万李 ,  朱莺莺 ,  李雯

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/60 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12P19/32 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种高效生产GDP-岩藻糖的大肠杆菌生产菌株，属于基因工程、微生物代谢工程技术领域。本发明以葡萄糖为底物，通过组合调控代谢通路中的磷酸甘露糖变位酶(ManB)、GDP-甘露糖焦磷酸化酶(ManC)、GDP-甘露糖4,6-脱水酶(Gmd)和GDP-岩藻糖合成酶(WcaG)的表达从而缓解GDP-岩藻糖合成通路的代谢压力。本发明还通过CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除大肠杆菌中分解GDP-岩藻糖的基因UDP-葡萄糖脂质载体转移酶(WcaJ)以及加强代谢通路中的辅因子的再生进一步提高胞内GDP-岩藻糖的积累。

公开(公告)号：CN108034648A

公开(公告)日：2018-05-15

申请号：CN201810059404.6

申请日：2018-01-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  黄嘉苇 ,  江波 ,  张涛

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12P19/24 ,  C12P19/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明将来源于微生物Dorea sp.的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶作为亲本，构建了突变体酶F154Y/E191D/I193F，该突变体的热稳定性和结构稳定性得到了提高：50℃和60℃的t1/2值分别达到20.47和3.09h；Tm值达到74.18℃。多点突变体的最适温度上升为75℃，与野生型酶相比提高了5℃。在最适催化条件下，酶催化底物D‑果糖生成D‑阿洛酮糖的相对酶活提高了3.8％，这一发现对于工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的研究价值。

公开(公告)号：CN108018269A

公开(公告)日：2018-05-11

申请号：CN201810060609.6

申请日：2018-01-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  徐炜 ,  江波 ,  张涛

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/02 ,  C12P19/04 ,  C12P19/18 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的果聚糖蔗糖酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明将来源于微生物Brenneria sp.EniD312的果聚糖蔗糖酶作为亲本，利用基因突变技术，将其404位的谷氨酸Glu替换成色氨酸Trp，获得单突变体酶E404W；在最适催化条件下，酶催化底物蔗糖合成β‑(2,1)果聚糖levan的总酶活在35℃的半衰期由原来的4h提高到52h，45℃的半衰期由原来的2.1h提高到12.5h，55℃的半衰期由原来的42min提高到104min，这一发现对于工业化制备果聚糖levan具有重要的研究价值。