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公开(公告)号：CN113186142A
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202110389910.3
申请日：2021-04-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种高效生产2′‑岩藻糖基乳糖的大肠杆菌工程菌株，属于合成生物学和微生物代谢工程技术领域。本发明以甘油为碳源，乳糖和L‑岩藻糖为底物，通过引入自组装短肽介导通路关键酶Fkp和FutC组装结合成酶复合物，从而减少代谢中间产物的流失提高产物生产效率，提高产物2′‑FL生产产量和产率。此外，还通过CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除大肠杆菌中与底物降解以及中间产物分流相关的一系列基因，同时加强代谢通路中的辅因子的循环再生进一步提高2′‑FL的产量。使得到的大肠杆菌工程菌株在3L发酵罐条件下分批补料64小时可积累30.5g/L的2′‑FL，摩尔产率为0.661mol2′‑FL/mol岩藻糖和0.495mol2′‑FL/mol乳糖。对于工业化生产2′‑FL具有重要意义。
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公开(公告)号：CN113186142B
公开(公告)日：2023-01-31
申请号：CN202110389910.3
申请日：2021-04-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种高效生产2′‑岩藻糖基乳糖的大肠杆菌工程菌株，属于合成生物学和微生物代谢工程技术领域。本发明以甘油为碳源，乳糖和L‑岩藻糖为底物，通过引入自组装短肽介导通路关键酶Fkp和FutC组装结合成酶复合物，从而减少代谢中间产物的流失提高产物生产效率，提高产物2′‑FL生产产量和产率。此外，还通过CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除大肠杆菌中与底物降解以及中间产物分流相关的一系列基因，同时加强代谢通路中的辅因子的循环再生进一步提高2′‑FL的产量。使得到的大肠杆菌工程菌株在3L发酵罐条件下分批补料64小时可积累30.5g/L的2′‑FL，摩尔产率为0.661mol2′‑FL/mol岩藻糖和0.495mol2′‑FL/mol乳糖。对于工业化生产2′‑FL具有重要意义。
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公开(公告)号：CN110804577A
公开(公告)日：2020-02-18
申请号：CN201911188891.7
申请日：2019-11-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种生产2’-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌工程菌株，通过CRISPR/Cas9基因编辑系统，敲除原始菌株2’-岩藻糖基乳糖合成代谢途径中的相关基因；构建模块化代谢通路，通过不同质粒组合调控代谢途径中的磷酸甘露糖变位酶(ManB)，甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶(ManC)，GDP-甘露糖-6-脱氢酶(Gmd)，GDP-岩藻糖合成酶(WcaG)，L-岩藻糖1-激酶/GDP-岩藻糖焦磷酸化酶(Fkp)以及2’-岩藻糖基乳糖合成酶(FucT2)的表达水平，使细胞内能积累更高浓度的2’-岩藻糖基乳糖。本发明还提供了一种高效生产2’-岩藻糖基乳糖的方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110734889A
公开(公告)日：2020-01-31
申请号：CN201911092950.0
申请日：2019-11-11
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/90 , C12N15/61 , C12N15/60 , C12N15/54 , C12N15/53 , C12P19/32 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供了一种高效生产GDP-岩藻糖的大肠杆菌生产菌株，属于基因工程、微生物代谢工程技术领域。本发明以葡萄糖为底物，通过组合调控代谢通路中的磷酸甘露糖变位酶(ManB)、GDP-甘露糖焦磷酸化酶(ManC)、GDP-甘露糖4,6-脱水酶(Gmd)和GDP-岩藻糖合成酶(WcaG)的表达从而缓解GDP-岩藻糖合成通路的代谢压力。本发明还通过CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除大肠杆菌中分解GDP-岩藻糖的基因UDP-葡萄糖脂质载体转移酶(WcaJ)以及加强代谢通路中的辅因子的再生进一步提高胞内GDP-岩藻糖的积累。
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公开(公告)号：CN110734889B
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN201911092950.0
申请日：2019-11-11
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/90 , C12N15/61 , C12N15/60 , C12N15/54 , C12N15/53 , C12P19/32 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供了一种高效生产GDP‑岩藻糖的大肠杆菌生产菌株，属于基因工程、微生物代谢工程技术领域。本发明以葡萄糖为底物，通过组合调控代谢通路中的磷酸甘露糖变位酶(ManB)、GDP‑甘露糖焦磷酸化酶(ManC)、GDP‑甘露糖4,6‑脱水酶(Gmd)和GDP‑岩藻糖合成酶(WcaG)的表达从而缓解GDP‑岩藻糖合成通路的代谢压力。本发明还通过CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除大肠杆菌中分解GDP‑岩藻糖的基因UDP‑葡萄糖脂质载体转移酶(WcaJ)以及加强代谢通路中的辅因子的再生进一步提高胞内GDP‑岩藻糖的积累。
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公开(公告)号：CN110804577B
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN201911188891.7
申请日：2019-11-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种生产2’‑岩藻糖基乳糖的大肠杆菌工程菌株，通过CRISPR/Cas9基因编辑系统，敲除原始菌株2’‑岩藻糖基乳糖合成代谢途径中的相关基因；构建模块化代谢通路，通过不同质粒组合调控代谢途径中的磷酸甘露糖变位酶(ManB)，甘露糖‑1‑磷酸鸟嘌呤基转移酶(ManC)，GDP‑甘露糖‑6‑脱氢酶(Gmd)，GDP‑岩藻糖合成酶(WcaG)，L‑岩藻糖1‑激酶/GDP‑岩藻糖焦磷酸化酶(Fkp)以及2’‑岩藻糖基乳糖合成酶(FucT2)的表达水平，使细胞内能积累更高浓度的2’‑岩藻糖基乳糖。本发明还提供了一种高效生产2’‑岩藻糖基乳糖的方法。
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公开(公告)号：CN111979168B
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202010834657.3
申请日：2020-08-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N9/90 , C12N9/12 , C12N9/10 , C12N9/38 , C12N9/78 , C12P19/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种提高乳酰‑N‑三糖II产量的基因工程菌及生产方法，属于微生物基因工程领域。本发明通过组合调控乳酰‑N‑三糖II合成途径中glmM，glmU，glmS以及lgtA的表达，从而精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力，敲除大肠杆菌宿主乳酰‑N‑三糖II合成途径中wecB，nagB和lacZ的表达，进一步提高乳酰‑N‑三糖II的产量，在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰‑N‑三糖II的能力由0.53g/L提升至4.82g/L，在3L发酵罐中，乳酰‑N‑三糖II的产量达到46.2g/L，具备工业应用的前景。
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公开(公告)号：CN111979168A
公开(公告)日：2020-11-24
申请号：CN202010834657.3
申请日：2020-08-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N9/90 , C12N9/12 , C12N9/10 , C12N9/38 , C12N9/78 , C12P19/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种提高乳酰-N-三糖II产量的基因工程菌及生产方法，属于微生物基因工程领域。本发明通过组合调控乳酰-N-三糖II合成途径中glmM，glmU，glmS以及lgtA的表达，从而精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力，敲除大肠杆菌宿主乳酰-N-三糖II合成途径中wecB，nagB和lacZ的表达，进一步提高乳酰-N-三糖II的产量，在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰-N-三糖II的能力由0.53g/L提升至4.82g/L，在3L发酵罐中，乳酰-N-三糖II的产量达到46.2g/L，具备工业应用的前景。
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