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公开(公告)号：CN115161286A
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN202210670166.9
申请日：2022-06-14
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/34 , C12N15/62 , C12N15/867 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种稳定表达非洲猪瘟病毒p30蛋白CHO细胞系及其构建方法，其构建方法为：在p30蛋白基因序列的起始密码子之前添加Kozac序列，在序列N端连接信号肽序列；再在肽链C端连接组氨酸标签体，并以融合蛋白连接，最后将其克隆至慢病毒包装载体，得到病毒表达载体；将慢病毒表达载体进行共转染，得到慢病毒包装病毒液，将其与CHO细胞混合感染，再经筛选培养后，观察及鉴定所得到的单克隆细胞株，再扩大培养并冻存；复苏冻存CHO细胞，连续培养15～20代，得到CHO细胞系。利用本发明的构建方法能在1个月内筛选获得所需细胞系，在连续传20代后仍能表达p30重组蛋白，具有试验周期短和成功率高的优点。
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公开(公告)号：CN114891073A
公开(公告)日：2022-08-12
申请号：CN202210495577.9
申请日：2022-05-08
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种可溶性VP2抗原，所述VP2抗原通过将VP2基因克隆到pColldⅢ载体上构成表达质粒pColldⅢ‑VP2，转化进入BL21(DE3)感受态细胞(pTf16分子伴侣)，得到基因工程菌种Escherichia coli pTf16/BL21/pColldⅢ‑VP2，提取得到可溶性VP2抗原；所述VP2基因的核苷酸序列如核苷酸序列NO.1所示。该抗原具有优异的免疫保护率，该效果和蛋白本身的可溶性以及空间结构密切相关；同时，本发明还提供了一种疫苗、抗原的制备方法。
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公开(公告)号：CN107164334B
公开(公告)日：2020-06-09
申请号：CN201710283815.9
申请日：2017-04-26
Applicant: 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒繁殖培养基及其应用，包括按体积百分比计的以下成分：DMEM培养基84.5‑96.9％；非必须要氨基酸0.5‑2％；脂肪酸0.1‑1.5％；维生素溶液0.5‑2％；肽类物质溶液2‑10％；该应用为将培养基应用于猪圆环病毒的培养中，培养包括以下步骤：1)将PK‑15细胞经传代和培养；2)病毒繁殖结束后，离心去除细胞碎片；3)采用超滤的方式去除小分子蛋白质，收集被截流的浓缩液；4)使用分子筛层析方法分离猪圆环病毒，收集第一个蛋白质峰，得到猪圆环病毒；该培养基使用氨基酸、脂肪酸、小肽等物质等替代血清，有利于提高病毒与在繁殖过程中产生的杂蛋白分离度，提高圆环灭活疫苗的品质。
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公开(公告)号：CN110777220A
公开(公告)日：2020-02-11
申请号：CN201911129895.8
申请日：2019-11-18
Applicant: 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12Q1/6804 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于病毒株鉴别方法技术领域，具体为一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株的引物组和探针，包括第一引物组和第一探针；所述第一引物组中的上游引物如序列SEQ ID NO：1所示；所述第一引物组中的下游引物为5’端带有生物素的如序列SEQ ID NO：2所示的DNA分子；所述第一探针为5’端带有羧基荧光素、3’端带有C3-spacer基团的如序列SEQ ID NO：3所示的DNA分子。同时，还提供了一种用于检测MGF360-505R基因缺失株的引物组和探针；该引物组和探针组特异性强、灵敏度高，同时，本发明还提出了基于RPA-LFD技术和上述引物组和探针组的RPA试纸条试剂盒和鉴别方法。
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公开(公告)号：CN109517808A
公开(公告)日：2019-03-26
申请号：CN201811389187.3
申请日：2018-11-21
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/50 , C12N15/63 , A61K39/215 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一株M蛋白糖基化位点突变的传染性支气管炎病毒及其制备方法与应用。本发明利用反向遗传学技术，获得IBV全长感染性克隆，再以其为模板，对IBV M蛋白糖基化位点进行N→D的点突变，体外转录电转染细胞后获得IBV M蛋白突变病毒株。该突变株的获得有助于研究IBV M蛋白糖基化位点突变对M蛋白的结构、病毒的增殖能力及其对细胞内质网压力的影响，判断病毒的复制能力和致病力是否发生改变，并且为研制IBV减毒疫苗提供了参考方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109207439A
公开(公告)日：2019-01-15
申请号：CN201811172272.4
申请日：2018-10-09
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种鸭瘟病毒的全悬浮培养方法，包括以下步骤：步骤1：鸭胚细胞衍生的传代细胞系的复苏与传代培养。步骤2：采用二阶培养法，向全悬浮培养的鸭胚细胞衍生的传代细胞系接种鸭瘟病毒，实现病毒大规模培养。步骤3：接毒后，每隔12h取样测定病毒的TCID50，在病毒TCID50达到最高时收获病毒并保存，得到培养后的鸭瘟病毒。本发明的全悬浮培养方法提高了病毒培养规模和效率，符合未来疫苗生产的趋势，有广阔的应用前景及蕴含良好的经济效益。
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公开(公告)号：CN108261543A
公开(公告)日：2018-07-10
申请号：CN201810128488.4
申请日：2018-02-08
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
IPC: A61K39/17 , A61K39/215 , A61K39/145 , C12N7/00 , A61P31/14 , A61P31/16 , C12R1/09
CPC classification number: A61K39/12 , A61K2039/5252 , A61K2039/70 , C12N7/00 , C12N2760/16134 , C12N2760/16152 , C12N2760/18134 , C12N2760/18152 , C12N2770/20034 , C12N2770/20052
Abstract: 本发明提供了一种传代细胞源鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗的制备方法及其应用，包括步骤如下：取EB66细胞于生物反应器中进行生长培养，用于病毒接种；采用二阶培养法，向EB66细胞接种新城疫病毒、传染性支气管炎病毒或禽流感病毒；在接毒24h后，病毒EID50达到最高时收获病毒并保存，得到病毒液；重复上述步骤以分别获得新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和禽流感病毒液并灭活；将灭活后的新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和禽流感病毒液混合，制备灭活疫苗。本发明采用EB66传代细胞系进行鸡新城疫病毒、传染性支气管炎和禽流感病毒的培养，避免了使用鸡胚造成胚体异源蛋白和外源病毒污染的风险，提高病毒的生产品质，简化病毒的生产工艺。
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公开(公告)号：CN107475245A
公开(公告)日：2017-12-15
申请号：CN201710786499.7
申请日：2017-09-04
Applicant: 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/10
CPC classification number: C12N15/1003
Abstract: 本发明提供了一种简易的质粒粗提的方法，具体为：在含有质粒的基因工程菌体中加入PBS溶液重悬；加入20～100ug/ml的RNA酶和1～10mg/ml的溶菌酶；搅拌混匀，搅拌速度为100～5000rpm/min，搅拌的时间为10～50min；反复冻融3～6次，每次冻融后，进行搅拌，搅拌速度和时间同上；3000～10000rpm/min离心20～60min，取上清液；向上清中加入乙醇，乙醇最终浓度为60～80％；混匀后在2～8℃放置10～60min；8000～12000rpm/min离心15～90min，收集沉淀；加入TE溶液，电泳检测。本发明提取质粒的方法能够规模化，提取量不受限制；提取仅仅需要反复冻融菌体、乙醇沉淀两个主要步骤，避免了有毒有害试剂的使用；能够提取菌体中80％以上的质粒。
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公开(公告)号：CN106916842A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201710184041.4
申请日：2017-03-24
Applicant: 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司
IPC: C12N15/70 , C07K14/435 , C07K1/113 , C07K1/22 , C07K1/34
CPC classification number: C12N15/70 , C07K14/4359
Abstract: 本发明公开一种猫桎首蚤跳蚤唾液过敏原FSA1的表达方法，包括以下步骤：1)使用如SEQ ID No.1和PCR SEQ ID No.2所示的引物对进行PCR扩增；2)构建原核表达载体；3)筛选；4)诱导表达；5)纯化和6)复性。该方法各步骤操作简单，快速高效，是一种针对跳蚤唾液过敏原FSA1原核表达蛋白的纯化工艺，该工艺克服了已有工艺复性后复性浓度小，蛋白易聚集的缺陷，并且大大提高生产效率，降低生产成本，适合工业化大规模生产。
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公开(公告)号：CN106434568A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610828630.7
申请日：2016-09-18
Applicant: 广东温氏大华农生物科技有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种抗猪流行性腹泻病毒S蛋白杂交瘤细胞株及其应用，该杂交瘤细胞株命名为杂交瘤细胞株7D3F11，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏号为CCTCC NO：C201660。本发明通过生物技术手段制备的抗猪流行性腹泻病毒S蛋白杂交瘤细胞株7D3F11，为检测PEDV的感染建立了基础。
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