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公开(公告)号：CN116262915A
公开(公告)日：2023-06-16
申请号：CN202111530562.3
申请日：2021-12-14
Applicant: 廊坊梅花生物技术开发有限公司
Abstract: 本发明提供一种3‑异丙基苹果酸脱水酶突变体及其应用。本发明通过对leuD基因修饰，将3‑异丙基苹果酸脱水酶小亚基的第84位氨基酸由丙氨酸(A)突变为其他氨基酸，如亮氨酸(L)、缬氨酸(V)或异亮氨酸(I)，实现了对3‑异丙基苹果酸脱水酶的突变，使得微生物产副产物亮氨酸的能力下降，产缬氨酸的能力与未修饰的菌株相比增强，最终提高了缬氨酸的产量。本发明还提供一种利用微生物生产缬氨酸的方法以及能够高效生产缬氨酸的基因工程菌，该工程菌可用于发酵生产缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸等支链氨基酸或其衍生物。
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公开(公告)号：CN116240192A
公开(公告)日：2023-06-09
申请号：CN202310070429.7
申请日：2023-01-16
Applicant: 廊坊梅花生物技术开发有限公司
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，具体公开了一种组氨酸激酶突变体及含有其的重组微生物和应用。本发明提供的组氨酸激酶突变体，以野生型组氨酸激酶的氨基酸序列为参考序列，含有第53位谷氨酸被天冬氨酸取代的突变，或第58位谷氨酸被其他氨基酸取代的突变。具体含有第58位谷氨酸被天冬氨酸或精氨酸取代的突变。含有本发明突变体的重组微生物产氨基酸尤其是赖氨酸的能力更强，为发酵提升氨基酸产量提供了一种新方法。
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公开(公告)号：CN112574934B
公开(公告)日：2022-05-06
申请号：CN202011086294.6
申请日：2020-10-12
Applicant: 廊坊梅花生物技术开发有限公司
Abstract: 本发明提供高产鸟苷的工程菌及其构建方法与应用。本发明还提供发酵生产嘌呤核苷的方法，包括：1)改造细菌染色体上编码NCBI参考序列WP_038462632.1或WP_014469845.1的GMP合成酶基因，使其编码的GMP合成酶的第234位缬氨酸被其他氨基酸取代，导致该酶活性增强；和/或2)改造细菌染色体上编码NCBI参考序列WP_013353436.1的GMP还原酶基因，使其编码的GMP还原酶的第8位谷氨酸突变为终止密码子，导致该酶活性减弱或失活；以及3)用步骤1)和/或步骤2)改造得到的细菌发酵生产嘌呤核苷；所述细菌是具有嘌呤核苷生产能力的微生物。包含上述两种突变的微生物可用于发酵生产鸟苷并提高鸟苷发酵产量。
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公开(公告)号：CN112063571B
公开(公告)日：2022-05-06
申请号：CN202010821272.3
申请日：2020-08-14
Applicant: 廊坊梅花生物技术开发有限公司
Abstract: 本发明提供一种高产L‑氨基酸的工程菌及其构建方法与应用。所述工程菌是通过弱化原始菌株中基因NCgl2493和/或NCgl0224，获得的基因弱化菌株；其中，原始菌株为产L‑氨基酸的棒状细菌。本发明提供的高产L‑氨基酸的工程菌，具有较高的L‑氨基酸(特别是L‑赖氨酸)生产能力，且棒状细菌胞内的NCgl2493基因和/或NCgl0224基因表达蛋白失活或弱化。实验表明，以本发明的高产L‑氨基酸的工程菌作为发酵菌种，其L‑赖氨酸产率和转化率显著提高，为L‑赖氨酸的工业化生产奠定了基础，应用前景广阔。
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公开(公告)号：CN113151238A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110565833.2
申请日：2021-05-24
Applicant: 廊坊梅花生物技术开发有限公司
Abstract: 本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种磷酸戊糖变位酶突变体及其在构建高产核苷的枯草芽孢杆菌中的应用。本发明发现磷酸戊糖变位酶第159位(丝氨酸突变为苯丙氨酸)和第336位(组氨酸突变为酪氨酸)的突变对在核苷积累中起到了主要作用，利用该发现可以构建和筛选高产核苷的枯草芽孢杆菌，有利于提高核苷的产量，为核苷的工业化生产奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107227283B
公开(公告)日：2021-01-15
申请号：CN201710385500.5
申请日：2017-05-26
Applicant: 廊坊梅花生物技术开发有限公司
Abstract: 本发明属于微生物领域，具体涉及一种谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用。本发明所述谷氨酸棒杆菌其细胞内编码6‑磷酸葡糖酸脱氢酶的gnd基因的第361位丝氨酸突变为苯丙氨酸。本发明所述谷氨酸棒杆菌对戊糖磷酸途径中的gnd基因进行点突变，使得6‑磷酸葡糖酸脱氢酶的第361位的丝氨酸被苯丙氨酸替代，而减弱6‑磷酸葡糖酸脱氢酶的变构调节，从而增强NADPH再生能力，为脯氨酸合成提供充足的NADPH，进而提高脯氨酸的产量。实验表明本发明所述谷氨酸棒杆菌为L‑脯氨酸高产菌株，能有效积累L‑脯氨酸，提高L‑脯氨酸的产量，为L‑脯氨酸的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112080534A
公开(公告)日：2020-12-15
申请号：CN202010821285.0
申请日：2020-08-14
Applicant: 廊坊梅花生物技术开发有限公司
Abstract: 本发明提供一种高产L‑氨基酸的工程菌及其构建方法与应用。所述工程菌是通过弱化原始菌株中50S核糖体蛋白基因，获得的基因弱化菌株；其中，原始菌株为产L‑氨基酸的棒状细菌。本发明提供的高产L‑氨基酸的工程菌，具有较高的L‑氨基酸(特别是L‑赖氨酸)生产能力，且棒状细菌胞内的50S核糖体蛋白L35、50S核糖体蛋白L36或50S核糖体蛋白L21蛋白表达被弱化。实验表明，以本发明的高产L‑氨基酸的工程菌作为发酵菌种，其L‑赖氨酸产率和转化率显著提高，为L‑赖氨酸的工业化生产奠定了基础，应用前景广阔。
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公开(公告)号：CN105695383B
公开(公告)日：2020-06-19
申请号：CN201610119402.2
申请日：2016-03-02
Applicant: 廊坊梅花生物技术开发有限公司
Abstract: 本发明涉及微生物领域，特别涉及重组菌株及其应用。实验结果表明，野生型谷氨酸棒杆菌ATCC 13869在未经改造前基本不产谷氨酸，本发明提供的菌株MHZ‑0112‑1谷氨酸的产量为4.7g/L；MHZ‑0112‑2谷氨酸的产量为18.5g/L；菌株MHZ‑0112‑4和MHZ‑0112‑5谷氨酸的产量分别为23.4g/L和26.4g/L。在单独利用强启动子Psod表达gdh基因，谷氨酸产量提高约1.8倍，单独利用Ptuf启动子表达gltA基因将CS酶活增加了4倍，谷氨酸产量提高至30.8g/L；将两个基因同时进行过表达后，谷氨酸产量继续提高至35.5g/L，转化率达到约59％。
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公开(公告)号：CN110157722A
公开(公告)日：2019-08-23
申请号：CN201910477728.6
申请日：2019-06-03
Applicant: 廊坊梅花生物技术开发有限公司
Abstract: 本发明属于生物化工技术领域，公开了一种重组载体，含有编码嘌呤碱基的DNA分子的载体；其中所述编码嘌呤碱基的DNA分子5’端连接有一个额外的起始密码子。所述重组载体转化宿主菌株获得重组菌株。本发明通过在编码嘌呤碱基的DNA分子引入双起始密码子，可有效提高基因的表达水平，通过pET系统异源表达本发明重组载体中的核苷水解酶基因，可获得高活力的核苷水解酶，相同制备条件获得更高活力的核苷水解酶，进而可提高水解腺苷和鸟苷效率，获得更多嘌呤碱和D-核糖。
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公开(公告)号：CN107227283A
公开(公告)日：2017-10-03
申请号：CN201710385500.5
申请日：2017-05-26
Applicant: 廊坊梅花生物技术开发有限公司
Abstract: 本发明属于微生物领域，具体涉及一种谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用。本发明所述谷氨酸棒杆菌其细胞内编码6‑磷酸葡糖酸脱氢酶的gnd基因的第361位丝氨酸突变为苯丙氨酸。本发明所述谷氨酸棒杆菌对戊糖磷酸途径中的gnd基因进行点突变，使得6‑磷酸葡糖酸脱氢酶的第361位的丝氨酸被苯丙氨酸替代，而减弱6‑磷酸葡糖酸脱氢酶的变构调节，从而增强NADPH再生能力，为脯氨酸合成提供充足的NADPH，进而提高脯氨酸的产量。实验表明本发明所述谷氨酸棒杆菌为L‑脯氨酸高产菌株，能有效积累L‑脯氨酸，提高L‑脯氨酸的产量，为L‑脯氨酸的工业化生产奠定了基础。
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