生产瓦伦西亚烯的酿酒酵母工程菌及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN110117551B

    公开(公告)日:2023-02-10

    申请号:CN201910271558.6

    申请日:2019-04-04

    Abstract: 本发明公开了一种生产瓦伦西亚烯的酿酒酵母工程菌及其构建方法与应用。该工程菌是通过将酵母基因组中全局抑制因子基因敲除和角鲨烯合成酶基因下调,表达瓦伦西亚烯合成酶和过表达HMG‑CoA还原酶,且优化瓦伦西亚烯合成酶启动子获得。本发明通过游离载体过表达代谢途径中的关键基因,提高瓦伦西亚烯合成途径中的代谢通量,优化酵母细胞工厂,再结合瓦伦西亚烯合成酶启动子的适配性研究,经培养优化得到的酿酒酵母工程菌实现了对瓦伦西亚烯的高效生产,瓦伦西亚烯细胞干重产量可达到124.40mg/g,具有广阔的工业应用前景,具有积极的经济和社会发展的意义。

    一种基于改造核糖体结合位点提高ε-己内酯产量的方法

    公开(公告)号:CN110938663B

    公开(公告)日:2022-12-16

    申请号:CN201911264718.0

    申请日:2019-12-11

    Abstract: 本发明公开了一种基于改造核糖体结合位点提高ε‑己内酯产量的方法。该方法以pRSFDuet为出发载体,将chmo基因和RBS21‑adh序列插入空载pRSFDuet中,得到pRSF‑RBS10‑CHMO‑RBS21‑ADH载体;根据核糖体结合位点的特征,设计新的CHMO RBS序列,构建含CHMO RBS序列的重组菌株,并诱导重组菌株表达ADH蛋白和CHMO蛋白后,收集活细胞进行静息催化,实现环己醇被催化高产ε‑己内酯。本发明提供的方法中得到的重组菌株能在16h内完全催化60mM环己醇,得到43.98mM的ε‑己内酯。该方法高效,周期短,节约资源,为工业高产ε‑己内酯提供了可能性。

    基于全细胞生物传感器的水溶性样品中重金属离子半定量检测方法

    公开(公告)号:CN114540390A

    公开(公告)日:2022-05-27

    申请号:CN202210085929.3

    申请日:2022-01-25

    Inventor: 李爽 马浩 朱晁谊

    Abstract: 本发明公开一种基于全细胞生物传感器的水溶性样品中重金属离子半定量检测方法,属于环境生物技术领域。该方法操作便利、耗时短、成本低、可视性好、易于定量。利用SRRz裂解基因作为报告元件,响应迅速,菌液在接触重金属2h内光密度明显下降。利用SRRz裂解基因作为报告元件,导致微生物菌体裂解,所得结果与Cd(II)离子浓度相关性较高,检测结果可实现裸眼判断,也可通过可见光分光光度计检测。利用X‑gal对释放到细胞外的β‑半乳糖苷酶进行检测,操作简便。该方法安全性好、无需添加试剂、不受色素干扰、耗时短成本低,具有特异性,易于实现高通量筛查,便于推广;可为重金属污染的日常检测和高通量筛查提供技术支持。

    一种一体化的碳氢化合物自热重整制氢反应器

    公开(公告)号:CN111661818A

    公开(公告)日:2020-09-15

    申请号:CN202010413922.0

    申请日:2020-05-15

    Abstract: 本发明公开了一种一体化的碳氢化合物自热重整制氢反应器,包括依次连接的蒸发单元、催化反应单元、混合与热交换单元及液气分离单元,其中蒸发单元含有空气进管、加热棒、热电偶和蒸发体,其保证燃料的正常汽化;催化反应单元含有反应筒、催化剂载体、加热环和热电偶,其保证燃料催化反应的正常进行;混合与热交换单元内设有反应产物流动通道、液态燃料混合封闭空间,其实现燃料的混合及预热;液气分离单元内设有集液腔和排液孔,用于液态与气态反应产物的分离。本发明具有集混合、蒸发、催化反应、热交换、液气分离功能于一体的特点,并且具有提高反应系统热利用率的优点。

    生产瓦伦西亚烯的酿酒酵母工程菌及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN110117551A

    公开(公告)日:2019-08-13

    申请号:CN201910271558.6

    申请日:2019-04-04

    Abstract: 本发明公开了一种生产瓦伦西亚烯的酿酒酵母工程菌及其构建方法与应用。该工程菌是通过将酵母基因组中全局抑制因子基因敲除和角鲨烯合成酶基因下调,表达瓦伦西亚烯合成酶和过表达HMG-CoA还原酶,且优化瓦伦西亚烯合成酶启动子获得。本发明通过游离载体过表达代谢途径中的关键基因,提高瓦伦西亚烯合成途径中的代谢通量,优化酵母细胞工厂,再结合瓦伦西亚烯合成酶启动子的适配性研究,经培养优化得到的酿酒酵母工程菌实现了对瓦伦西亚烯的高效生产,瓦伦西亚烯细胞干重产量可达到124.40mg/g,具有广阔的工业应用前景,具有积极的经济和社会发展的意义。

    一种银纳米颗粒聚集增强异硫氰酸罗丹明B荧光强度的方法

    公开(公告)号:CN109696428A

    公开(公告)日:2019-04-30

    申请号:CN201910033340.7

    申请日:2019-01-14

    Abstract: 本发明公开了一种银纳米颗粒聚集增强异硫氰酸罗丹明B荧光强度的方法,包括如下步骤:(1)银纳米颗粒的制备;(2)在银纳米颗粒表面修饰异硫氰酸罗丹明B,得表面修饰异硫氰酸罗丹明B的银纳米颗粒;(3)加入连接剂,表面修饰异硫氰酸罗丹明B的银纳米颗粒发生聚集,增强异硫氰酸罗丹明B荧光强度。本发明主要是利用贵金属纳米颗粒聚集耦合产生的“热点”,导致纳米颗粒间的局域电场显著增强,从而提高在其表面异硫氰酸罗丹明B的荧光发射效率,恢复甚至增强单分散下被银纳米颗粒淬灭的异硫氰酸罗丹明B荧光。该方法荧光增强明显,且样品能分散在水相,聚集前后荧光变化显著。

    一种遗传毒性物质检测载体及检测方法

    公开(公告)号:CN106636164A

    公开(公告)日:2017-05-10

    申请号:CN201710039988.6

    申请日:2017-01-18

    Inventor: 李爽 卓敏 袁鹏飞

    CPC classification number: C12N15/70 C12N2800/101 C12Q1/06 C12Q1/10

    Abstract: 本发明公开了一种遗传毒性物质检测载体及检测方法,该载体是自5’到3’端顺次连接有遗传毒性响应启动子,噬菌体裂解基因和大肠杆菌终止子的大肠杆菌表达载体。检测方法是将上述遗传毒性物质响应载体导入大肠杆菌中,得到重组菌,再将重组菌与遗传毒性物质孵育,大肠杆菌细胞裂解。所述大肠杆菌重组菌携带有遗传毒性响应载体,重组菌在接触遗传毒性化学物质时,会引发自身细胞裂解,通过裂解效率对遗传毒性物质定量的检测方法。该方法耗时短、检测灵敏度高、检测简便易行、成本低廉、易于推广。

    一种嗜热厌氧杆菌及利用其生产乙醇的方法

    公开(公告)号:CN104263680B

    公开(公告)日:2017-02-01

    申请号:CN201410453513.8

    申请日:2014-09-05

    CPC classification number: C12N1/20 C12P7/06 C12R1/01 Y02E50/17

    Abstract: 本发明涉及微生物菌株领域,特别涉及一种嗜热厌氧杆菌及利用其生产乙醇的方法。本发明菌 株 为 长 白 云 嗜 热 厌 氧 杆 菌(Thermoanaerobacterium aotearoense)P8G3#4,已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏编号为CGMCC NO.9000,保藏日期为2014年4月3日。利用所述菌株生产乙醇的方法:首先配制嗜热厌氧杆菌CGMCC9000的种子液,然后将嗜热厌氧杆菌CGMCC9000种子液以10-15%w/w接种量转接到发酵培养基中,在厌氧条件下搅拌培养,最后从发酵液分离出乙醇。该菌株遗传稳定性好,产量性状稳定,发酵迟滞期缩短至原来的1/4,节省了耗能。

    一种耐热β-甘露聚糖酶及其编码基因

    公开(公告)号:CN104611314A

    公开(公告)日:2015-05-13

    申请号:CN201510030119.8

    申请日:2015-01-21

    Inventor: 李爽 阳芳

    CPC classification number: C12N9/2494 C12Y302/01078

    Abstract: 本发明公开了一种耐热β-甘露聚糖酶及其编码基因,选自如下(a)或(b):(a)由序列表中SEQ ID No:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质;(b)将序列表中SEQ ID No:2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基取代和/或缺失和/或添加且具有耐热β-甘露聚糖酶活性的由(a)衍生的蛋白质。本发明所述的β-甘露聚糖酶具有较强分解槐豆胶(BGL)的活性,最适反应温度为55℃,最适反应pH为5.5,在50℃条件下处理120min,酶活保留约90%。研究表明,本发明所述的β-甘露聚糖酶具有高催化活力和较好耐热性,适用于对温度要求较高的多种微酸性工业环境,具有在生产中推广应用的巨大潜力。

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