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公开(公告)号：CN114350739A
公开(公告)日：2022-04-15
申请号：CN202111658178.1
申请日：2021-12-30
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开一种ε‑己内酯高产菌株的高通量筛选方法，属于高通量筛选技术领域。本发明将ADH和CHMO双酶级联反应产物ε‑己内酯的浓度与中间产物环己酮的浓度进行相关性分析发现，具有不同催化性能的菌株在全细胞催化反应后，中间产物环己酮浓度与产物ε‑己内酯浓度呈负相关关系，因此以环己酮为筛选标记，通过高通量筛选具有低环己酮浓度的菌株得到高产ε‑己内酯的菌株。本发明利用RBS工程技术构建ε‑己内酯产生菌的突变文库，筛选得到的七株突变菌株并进行摇瓶实验验证，催化70mM环己醇的ε‑己内酯产量，与出发菌株RCL0相比均获得显著提高。该方法操作步骤简单，可大幅降低菌株筛选过程的实验成本并缩短筛选周期。
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公开(公告)号：CN110938663A
公开(公告)日：2020-03-31
申请号：CN201911264718.0
申请日：2019-12-11
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种基于改造核糖体结合位点提高ε-己内酯产量的方法。该方法以pRSFDuet为出发载体，将chmo基因和RBS21-adh序列插入空载pRSFDuet中，得到pRSF-RBS10-CHMO-RBS21-ADH载体；根据核糖体结合位点的特征，设计新的CHMO RBS序列，构建含CHMO RBS序列的重组菌株，并诱导重组菌株表达ADH蛋白和CHMO蛋白后，收集活细胞进行静息催化，实现环己醇被催化高产ε-己内酯。本发明提供的方法中得到的重组菌株能在16h内完全催化60mM环己醇，得到43.98mM的ε-己内酯。该方法高效，周期短，节约资源，为工业高产ε-己内酯提供了可能性。
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公开(公告)号：CN114350739B
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202111658178.1
申请日：2021-12-30
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开一种ε‑己内酯高产菌株的高通量筛选方法，属于高通量筛选技术领域。本发明将ADH和CHMO双酶级联反应产物ε‑己内酯的浓度与中间产物环己酮的浓度进行相关性分析发现，具有不同催化性能的菌株在全细胞催化反应后，中间产物环己酮浓度与产物ε‑己内酯浓度呈负相关关系，因此以环己酮为筛选标记，通过高通量筛选具有低环己酮浓度的菌株得到高产ε‑己内酯的菌株。本发明利用RBS工程技术构建ε‑己内酯产生菌的突变文库，筛选得到的七株突变菌株并进行摇瓶实验验证，催化70mM环己醇的ε‑己内酯产量，与出发菌株RCL0相比均获得显著提高。该方法操作步骤简单，可大幅降低菌株筛选过程的实验成本并缩短筛选周期。
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公开(公告)号：CN110938663B
公开(公告)日：2022-12-16
申请号：CN201911264718.0
申请日：2019-12-11
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种基于改造核糖体结合位点提高ε‑己内酯产量的方法。该方法以pRSFDuet为出发载体，将chmo基因和RBS21‑adh序列插入空载pRSFDuet中，得到pRSF‑RBS10‑CHMO‑RBS21‑ADH载体；根据核糖体结合位点的特征，设计新的CHMO RBS序列，构建含CHMO RBS序列的重组菌株，并诱导重组菌株表达ADH蛋白和CHMO蛋白后，收集活细胞进行静息催化，实现环己醇被催化高产ε‑己内酯。本发明提供的方法中得到的重组菌株能在16h内完全催化60mM环己醇，得到43.98mM的ε‑己内酯。该方法高效，周期短，节约资源，为工业高产ε‑己内酯提供了可能性。
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