一种细胞共培养的装置及牛肌细胞与脂肪细胞的共培养方法

    公开(公告)号:CN110511871B

    公开(公告)日:2025-02-07

    申请号:CN201910911343.6

    申请日:2019-09-25

    Abstract: 本发明的一种细胞共培养的装置,涉及细胞培养领域,其是由皿体和皿盖构成,皿体为上开口的中空结构,皿体开口处有皿盖,皿体内有隔离圈,隔离圈将皿体的内部分割为区域Ⅰ和区域Ⅱ,隔离圈内有爬片。利用上述装置在实现牛肌细胞与脂肪细胞直接接触共培养的同时,又可将爬片上的单类细胞(肌细胞或脂肪细胞)进行收集进行后续转录组及蛋白组的分析处理,以用来研究共培养环境下对肌细胞或脂肪细胞的作用,因此有利于进一步探究肌细胞与脂肪细胞之间的相互作用;经多次观察证实用这种方法培养的肌细胞和脂肪细胞成活效率高、活力好、细胞特征明显,并与单独培养的肌细胞和脂肪细胞形态一致,是一种很好的体外研究模型,具有一定的推广研究价值。

    一种诱导牛成肌细胞分化的无血清培养基

    公开(公告)号:CN117660315A

    公开(公告)日:2024-03-08

    申请号:CN202311532581.9

    申请日:2023-11-17

    Abstract: 本发明涉及一种诱导牛成肌细胞分化的无血清培养基,该培养基是在基础培养基的基础上添加了以下组分:牛血清白蛋白浓度为0.5mg/ml‑2mg/ml,胰岛素浓度为10μg/ml‑40μg/ml,表皮生长因子浓度为5ng/ml‑20ng/ml,转铁蛋白浓度为2μg/ml‑10μg/ml,维生素C磷酸酯浓度为20μg/ml‑100μg/ml。本发明提供的无血清培养基能有效诱导牛成肌细胞的分化;该培养基不仅仅避免了添加血清,并且效果优于现有的血清培养基,用该培养基可以避免高成本、血清批次差异和动物福利等问题。

    一种扩增羚牛微卫星片段的引物组及其应用

    公开(公告)号:CN117210579A

    公开(公告)日:2023-12-12

    申请号:CN202311260182.1

    申请日:2023-09-27

    Abstract: 本发明提供了一种扩增羚牛微卫星片段的引物组以及其应用。将该引物组用于秦岭羚牛的亲子鉴定和分析羚牛种群内近交程度中,有助于圈养秦岭羚牛的亲本管理和繁殖选配,进而能够防止圈养动物由于种群过小所带来的遗传衰退现象,同时也为微卫星分子标记在羚牛种群亲子鉴定和结构研究提供了重要的参考价值。

    一种秦川牛体尺及肉质性状相关的SNP分子标记及其应用

    公开(公告)号:CN114921568B

    公开(公告)日:2023-04-07

    申请号:CN202210597655.6

    申请日:2022-05-30

    Abstract: 本发明公开了一种与秦川牛体尺及肉质性状相关的SNP分子标记,位于R3HDM1基因核苷酸序列(XM 024980895.1)第14外显子的多态性T/C位点,即g.62029166T/C位点;该位点与秦川牛体斜长、腰高、胸深、背膘厚、眼肌面积、眼肌深度性状显著相关。可以用于制备检测R3HDM1基因g.62029166T/C位点基因型试剂盒的应用,可提前预测肉牛体尺及肉质性状并用于早期肉用选种,加快肉牛遗传进展,节约生产成本。同时,提供了用于SNP位点检测的试剂盒和操作方法,可实现对肉牛群体快速检测并判定个体基因型,用于犊牛早期选种留种可加快肉牛肉用选育进程。

    牛骨骼肌分化相关DNA甲基化酶TET1与m6A甲基化酶METTL3互作鉴定和应用

    公开(公告)号:CN114480670B

    公开(公告)日:2022-12-06

    申请号:CN202210111782.0

    申请日:2022-01-26

    Inventor: 杨昕冉 昝林森

    Abstract: 本发明涉及牛骨骼肌分化相关DNA甲基化酶TET1与m6A甲基化酶METTL3互作鉴定和应用,提供了鉴定TET1的m6A甲基化水平的引物序列和方法,根据m6A‑seq测序和m6A‑IP‑qPCR鉴定了TET1的m6A水平在成肌分化中的变化;通过m6A位点的同义突变改变TET1的m6A甲基化水平,证明了TET1的m6A甲基化具有影响骨骼肌分化功能;提供了检测TET1受m6A甲基化修饰调控方法,证明TET1的表达受METTL3‑m6A‑YTHDF1的调控;提供了检测DNA甲基化影响m6A甲基化修饰方法,证明了牛骨骼肌分化中DNA甲基化与RNA甲基化的互作,为肉牛的定向选育提供了一种新的分子标记。

    一种牛脂肪细胞的microRNA及其应用

    公开(公告)号:CN109628449B

    公开(公告)日:2022-05-31

    申请号:CN201811547739.9

    申请日:2018-12-18

    Abstract: 本发明涉及一种牛脂肪细胞的microRNA,该牛脂肪细胞的microRNA是bta‑miR‑33a,其序列为GUGCAUUGUAGUUGCAUUGCA,利用化学合成bta‑miR‑33a的mimic和NC。根据申请人的实验表明,bta‑miR‑33a的mimic抑制脂肪细胞的增殖分化过程。可以用于调控牛前体脂肪细胞增殖分化的应用。

    一种秦川肉牛肌内脂肪细胞分离的方法

    公开(公告)号:CN109486752B

    公开(公告)日:2022-05-27

    申请号:CN201811547543.X

    申请日:2018-12-18

    Abstract: 本发明涉及一种秦川肉牛肌内脂肪细胞的分离纯化和鉴定方法,使用II型胶原酶对秦川肉牛背最长肌进行消化,经II型胶原酶消化后的组织块用含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中和,经过滤、离心得到细胞,细胞再经洗涤、离心后重悬于含有10%FBS的DMEM/F12培养基中,计数后,将细胞接种在培养皿中,在CO2培养箱中培养1.5小时,用无菌磷酸缓冲盐溶液洗涤除去非粘附细胞,然后将细胞培养在37℃、CO2浓度为5%的培养箱中,每隔2天换一次培养基,待细胞汇合度达到70%‑80%后,进行细胞免疫荧光标记阳性细胞鉴定。该方法获得的肉牛肌内脂肪细胞具有较高的前脂肪细胞阳性比率,为提高肌内脂肪沉积的同时不增加皮下及内脏脂肪沉积的研究奠定了基础。

    一种密码子优化的重组人溶菌酶基因及其应用

    公开(公告)号:CN108624606B

    公开(公告)日:2021-07-13

    申请号:CN201810257256.9

    申请日:2018-03-27

    Inventor: 成功 昝林森 王力

    Abstract: 本发明涉及一种密码子优化的重组人溶菌酶基因及其应用,该密码子优化的重组人溶菌酶基因是通过比较牛乳腺优势乳蛋白高频密码子和低频密码子对人溶菌酶密码子进行全局优化(Lyzop)和翻译起始后23位密码子进行优化(Lyzop23)。优化后的密码子显著提高了人溶菌酶mRNA稳定性及在牛乳腺细胞中mRNA表达量。通过蛋白免疫印迹实验证明,密码子优化的重组人溶菌酶基因在牛乳腺细胞中表达量是野生型的2.18倍。为今后细胞生物反应器以及牛乳腺生物反应器高效生产重组人溶菌酶提供了工具基因。同时,将密码子优化的重组人溶菌酶基因与荧光素酶融合表达,通过分析荧光素酶表达量,实现密码子优化效果的快速、准确评价,为今后开展基因密码子优化提供了新的可靠评价方法。

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