基因敲入方法及其在构建内源性融合基因和原代细胞基因敲入中的应用

    公开(公告)号:CN115851720A

    公开(公告)日:2023-03-28

    申请号:CN202211198121.2

    申请日:2022-09-29

    Inventor: 姚瑶 饶书权

    Abstract: 本发明提供了一种基因敲入方法及其在构建内源性融合基因和原代细胞基因敲入中的应用,涉及基因工程的技术领域。该基因敲入方法包括将Cas核酸酶与sgRNA形成的核糖核蛋白复合物和供体DNA同时递送到受体细胞;其中供体DNA为双链寡核苷酸,双链寡核苷酸中各链的5’端经磷酸化修饰;且各链的5’端和3’端起始1~3个连接键为硫代磷酸键;递送采用电转染的方式。该基因敲入方法提升了在原代细胞中进行精确的基因片段插入和整合的效率,并可应用于原代细胞及其他细胞系中添加多种内源性标记。

    一种人源骨髓基质细胞系及其应用

    公开(公告)号:CN119506201A

    公开(公告)日:2025-02-25

    申请号:CN202411856664.8

    申请日:2024-12-17

    Abstract: 本发明提供了一种人源骨髓基质细胞系及其应用。本发明首次成功建立了一种能够高效促进体外造血生成和造血细胞诱导分化的人源骨髓基质细胞系hFSC022。本发明建立的人源骨髓基质细胞系来源于废弃的人源骨髓组织,与鼠源滋养细胞相比,无种属交叉风险,具有更高的安全性,更适合临床研究使用;与鼠源滋养细胞或其他人源骨髓组织来源的基质细胞相比,具有更强的促造血生成能力;体外培养中无动物源成份,满足临床应用的细胞治疗级要求,更适合于临床研究应用。同时,本发明建立的细胞系可以作为一种滋养细胞或组合药物,用于支持人造血干/祖细胞的体外维持或增殖,以及诱导人多能干细胞向造血细胞分化,在体外造血生成和细胞治疗领域具有广阔应用前景。

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