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公开(公告)号：CN115851720A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202211198121.2
申请日：2022-09-29
Applicant: 细胞生态海河实验室
IPC: C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/87 , C12N15/65 , C12N15/12
Abstract: 本发明提供了一种基因敲入方法及其在构建内源性融合基因和原代细胞基因敲入中的应用，涉及基因工程的技术领域。该基因敲入方法包括将Cas核酸酶与sgRNA形成的核糖核蛋白复合物和供体DNA同时递送到受体细胞；其中供体DNA为双链寡核苷酸，双链寡核苷酸中各链的5’端经磷酸化修饰；且各链的5’端和3’端起始1～3个连接键为硫代磷酸键；递送采用电转染的方式。该基因敲入方法提升了在原代细胞中进行精确的基因片段插入和整合的效率，并可应用于原代细胞及其他细胞系中添加多种内源性标记。
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