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公开(公告)号：CN103224951A
公开(公告)日：2013-07-31
申请号：CN201310028216.4
申请日：2013-01-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种人白细胞介素29成熟肽第35位精氨酸定点突变为赖氨酸的变异体(hIL-29G)及其制备方法，属于生物工程领域。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工设计合成hIL-29成熟肽的上下游引物和定点突变引物；2)用上下游引物从hIL-29的cDNA扩增hIL-29成熟肽编码基因，再用突变引物对第104位碱基进行定点突变；3)构建含hIL-29变异体编码基因的重组真核表达载体，转化毕赤酵母，获得重组酵母工程菌；4)培养重组酵母工程菌，于培养液添加1.5％(v/v)甲醇诱导其表达hIL-29变异体；5)采用SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析从培养液上清纯化hIL-29变异体。本发明构建的酵母工程菌可进行高密度培养并分泌表达第35位精氨酸突变为赖氨酸的hIL-29突变体，适用于工业化制备人白细胞介素29成熟肽突变体。
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公开(公告)号：CN102994470A
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN201210562633.2
申请日：2012-12-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出一种源于Aspergillus usamii E001的新型B类环氧化物水解酶基因成熟肽cDNA序列的克隆及原核表达方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1，相应的氨基酸序列为SEQID NO：2，相应的基因命名为Aus EH-B。手性气相柱分析rEH对(R)-环氧氯丙烷具有良好的立体选择性，生产(S)-环氧氯丙烷对映体过量值达99％。为该环氧化物水解酶的产业化生产奠定基础，对EH酶动力学拆分法研究为生物催化技术产业化制备手性环氧氯丙烷提供基础。
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公开(公告)号：CN102719457A
公开(公告)日：2012-10-10
申请号：CN201110410553.0
申请日：2011-12-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种新型地利用计算机技术与生物信息学方法对常温的木聚糖酶进行理性设计，运用基因工程的方法构建杂合木聚糖酶工程菌以及重组杂合木聚糖酶的高效表达的方法。将来源于米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC 40186菌株的常温木聚糖酶基因进行热稳定性定向改造，获得了两种杂合木聚糖酶，其热稳定性有了很大的提高，作为一种耐热型的酶制剂，该木聚糖酶具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN102492708A
公开(公告)日：2012-06-13
申请号：CN201110410508.5
申请日：2011-12-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种源自米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC 40186的新型10家族木聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆方法及分析，其核苷酸序列分别为SEQ IDNO：1和SEQ ID NO：2。生物信息学分析表明该木聚糖酶属于糖苷水解酶第10家族，命名为Aor Xyn10B，其氨基酸序列为SEQ ID NO：3，相应的基因命名为Aor xyn10B。这为该基因的异源表达和工业化生产奠定了理论基础。作为一种新型酶制剂，该木聚糖酶具有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值，也为其它木聚糖酶的研究奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN102392043A
公开(公告)日：2012-03-28
申请号：CN201110413360.0
申请日：2011-12-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种重组人白细胞介素32β的制备方法及表达重组hIL-32β的毕赤酵母工程菌。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工合成引物；2)从健康人外周血单个核细胞经反转录PCR得到hIL-32β的编码基因；3)构建含有hIL-32β编码基因的重组真核表达载体，融合于毕赤酵母表达调控元件获得重组毕赤酵母工程菌；4)培养重组毕赤酵母工程菌，于培养液添加甲醇诱导毕赤酵母工程菌表达重组hIL-32β；5)采用离子交换层析和分子筛层析从培养液上清纯化重组hIL-32β。本发明构建的重组毕赤酵母工程菌可进行高密度培养并且分泌型表达重组hIL-32β，适用于工业化制备重组人白细胞介素32β。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102392042A
公开(公告)日：2012-03-28
申请号：CN201110413167.7
申请日：2011-12-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种重组刀额新对虾精氨酸激酶的制备方法及表达重组刀额新对虾精氨酸激酶的毕赤酵母工程菌。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工合成引物；2)从刀额新对虾肌肉匀浆经反转录PCR得到精氨酸激酶的编码基因；3)构建含有刀额新对虾精氨酸激酶编码基因的重组真核表达载体，融合于毕赤酵母表达调控元件获得重组毕赤酵母工程菌；4)培养重组毕赤酵母工程菌，于培养液添加甲醇诱导毕赤酵母工程菌表达刀额新对虾精氨酸激酶；5)采用离子交换层析和分子筛层析从培养液上清纯化重组刀额新对虾精氨酸激酶。本发明构建的重组毕赤酵母工程菌可进行高密度培养并且分泌型表达重组刀额新对虾精氨酸激酶，适用于工业化制备重组刀额新对虾精氨酸激酶。
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公开(公告)号：CN102392035A
公开(公告)日：2012-03-28
申请号：CN201110410463.1
申请日：2011-12-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001菌株的新型壳聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆方法，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。生物信息学分析表明该壳聚糖酶属于糖苷水解酶第75家族，命名为Aus CsnA，其氨基酸序列为SEQ ID NO：3，相应的基因命名为Aus csnA。本发明还公开了Aus CsnA工程菌的构建以及重组Aus CsnA的高效表达和纯化的方法，制备的重组Aus CsnA的最适作用温度和pH分别为50℃和5.0，在pH 4.0-7.0、50℃以下稳定，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN102154251A
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN201010602818.2
申请日：2010-12-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种利用黑曲霉生产羧肽酶的方法，属于生物工程技术领域。本发明采用麸皮、豆饼粉和玉米粉等农副产品为发酵基料，通过适当改变培养基中碳源和氮源的比例，优化酶液提取时间，利用黑曲霉(Aspergillus niger)LW-1菌株固态发酵生产羧肽酶。本发明提供了实验室小试生产的固态发酵培养基配方和培养条件，成熟发酵曲料的羧肽酶活性达到3194.4U/g～5584.2U/g。本发明具有设备简单、投入少、见效快、生产成本低廉、对环境友好以及羧肽酶活性较高等特点，有利于羧肽酶的开发和利用，具有较高的经济和实用价值。
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公开(公告)号：CN102154242A
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN201010581422.4
申请日：2010-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001菌株的新型β-1，4-内切木聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆和分析方法，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。生物信息学分析表明该β-1，4-内切木聚糖酶是在A.usamii E001中发现的第三种11家族的木聚糖酶，所以命名为Aus Xyn11C，其氨基酸序列为SEQ ID NO：3，相应的基因命名为Aus xyn11C。这为该基因的异源表达和工业化生产奠定了理论基础，有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值，也为其它β-1，4-内切木聚糖酶的研究奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN102154240A
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN201010550873.1
申请日：2010-11-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/42
Abstract: 一种利用宇佐美曲霉生产壳聚糖酶的方法，属于生物工程技术领域。本发明以麸皮、豆饼粉和菜籽饼粉等农副产品为发酵基料，并添加适量的无机氮源、壳聚糖、无机盐和表面活性剂等，利用宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001菌株固态发酵生产壳聚糖酶。本发明提供了宇佐美曲霉E001菌株实验室小试生产壳聚糖酶的固态发酵培养基配方和培养条件，其成熟发酵曲料的壳聚糖酶活性达到1942～2461U/g干曲。本发明具有设备简单、投入少、见效快、生产成本低廉、对环境友好以及壳聚糖酶发酵酶活性较高等特点，有利于壳聚糖酶的开发和利用，具有较高的经济和实用价值。
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