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公开(公告)号：CN116376979A
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202310353553.4
申请日：2023-04-04
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9编辑技术的敲除鸡柯萨奇腺病毒受体CAR基因的细胞系的构建方法，包括以下步骤：步骤1)、设计一种特异性靶向鸡CAR基因的sgRNA；步骤2)、构建一种用于靶向敲除鸡CAR基因的CRISPR‑Cas9系统，CRISPR‑Cas9系统中含有Cas9蛋白和上述特异性靶向鸡CAR基因的sgRNA，或者含有携带编码Cas9蛋白的编码序列和编码sgRNA的编码序列；CRISPR‑Cas9系统中，Cas9蛋白基因和sgRNA序列位于同一载体上，所述载体为lentiCRISPR v2；步骤3)、将lentiCRISPR v2质粒转染到细胞中，利用CRISPR‑Cas9系统编辑实现CAR基因沉默，通过药物筛选杀死阴性细胞，随后通过亚克隆的方法获得单克隆细胞株，从而获得鸡源CAR敲除的细胞系。本发明为探究CAR生物学功能与解析CAR基因在FAdV‑8b的感染中的作用打下了基础，具有较大的应用研究价值。
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公开(公告)号：CN116286685A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310186696.0
申请日：2023-03-01
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/44 , C12N15/34 , C12N15/113 , C12N15/861 , C12N15/65 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达H9N2禽流感病毒XZ491毒株HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入H9N2禽流感病毒HA基因，成功获得H9N2禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为同时免疫防控血清4型禽腺病毒和H9亚型禽流感病毒提供技术支撑和疫苗候选。与传统的重组禽腺病毒构建方法不同，本发明中靶向毒力基因fiber‑2，使用了双荧光体系，且整合了CRISPR/Cas9技术和Cre‑loxP重组系统，不需要对禽腺病毒全基因组进行克隆，使得重组禽腺病毒的构建、筛选及其纯化非常快捷及高效。
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公开(公告)号：CN115980344A
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202210805714.4
申请日：2022-07-08
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/58 , C07K14/08 , C12N15/866 , C12N15/40 , C07K1/22
Abstract: 本发明涉及一种基于昆虫细胞表达产物的检测新型鹅星状病毒抗体的ELISA试剂盒，本发明的原理是将表达新型GAstV的ORF2重组蛋白的杆状病毒感染Sf9细胞，并以镍柱亲和层析法纯化感染细胞裂解液上清中的ORF2重组蛋白，将纯化的重组蛋白分别作为包被抗原组装检测新型GAstV抗体的间接ELISA试剂盒。研究结果表明，建立的检测新型GAstV抗体的间接ELISA试剂盒具有良好的特异性和灵敏性，在新型GAstV病毒流行病学调查中具有良好的应用价值。
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公开(公告)号：CN109836478B
公开(公告)日：2022-06-14
申请号：CN201910208025.3
申请日：2019-03-19
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/01 , C07K16/08 , C07K16/06 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了非洲猪瘟病毒P11.5蛋白特异性多克隆抗体的制备方法及应用，该方法利用P11.5多肽表位免疫实验动物如小鼠、兔等制备特异性多克隆抗体。该方法抗原纯度高，制备的抗体特异性强，亲和力高，使用的抗原量少，操作简便。所述的多克隆抗体的制备方法包括ASFV P11.5的特异性抗原表位的选择，多肽抗原的合成，动物免疫，抗体的测定等步骤。与常规方法比较，具有简便快速，抗原纯度高，制备的抗体特异性强，抗原使用量少的优点。该多克隆抗体可以用于非洲猪瘟病毒P11.5蛋白检测，为我国非洲猪瘟的防控提供重要的技术方法。
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公开(公告)号：CN114457115A
公开(公告)日：2022-05-10
申请号：CN202210220996.1
申请日：2022-03-08
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/40 , C12N7/01
Abstract: 本发明涉及一种表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建GAstV‑ORF2基因重组杆状病毒表达载体：（2）表达重组GAstV‑ORF2蛋白的杆状病毒包装和传代：（3）将携带有GAstV‑ORF2基因的杆状病毒质粒转染进Sf9细胞，并在27℃无CO2培养箱中培养5‑7天，每天观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞上清，放入‑80℃保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒保存并扩大培养，得到表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒。本发明的原理是通过扩增鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2全长片段，构建杆状病毒重组载体，转染Sf9细胞，获得能够表达衣壳蛋白ORF2的杆状病毒。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109295012B
公开(公告)日：2021-08-06
申请号：CN201811212808.0
申请日：2018-10-18
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种构建表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒方法，具体为：设计PCR扩增ALV‑J传染性克隆线性化表达载体引物以及PCR扩增ALV‑K‑env基因引物序列；PCR扩增ALV‑K囊膜蛋白基因片段和ALV‑J传染性克隆线性化载体，构建重组传染性克隆质粒，并将重组质粒转染DF‑1细胞拯救出表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒。本发明利用ALV‑J传染性克隆，构建了高效复制及表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒。这一重组病毒的获得不仅为研究ALV‑K囊膜蛋白功能受体及其致病性打下了基础，更能够为临床检测ALV‑K的中和抗体提供靶向病毒。
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公开(公告)号：CN112630427A
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN202011371468.3
申请日：2020-11-30
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , C12N15/50 , C12N15/85 , C12N5/10 , C07K14/165
Abstract: 本发明公开了一种基于S1蛋白的检测流行QX型鸡传染性支气管病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒，该试剂盒包括表达S1蛋白的LMH细胞，FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液，洗涤液。本发明试剂盒具有良好的特异性；该试剂盒不仅能用于QX型鸡传染性支气管病毒感染状况流行病学调查，而且能有效用于监测免疫鸡群QX型鸡传染性支气管病毒抗体水平，用于评价免疫保护性抗体水平等。
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公开(公告)号：CN112430652A
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN202011354422.0
申请日：2020-11-27
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种实时荧光绝对定量检测家禽干扰素刺激因子的试剂盒、检测方法及应用。本发明实时荧光绝对定量检测家禽干扰素刺激因子的试剂盒，包含：上游引物、下游引物以及Taq Man探针。本发明提供利用上述的试剂盒检测家禽干扰素刺激因子的方法，包括：将标准品模板和待测样品DNA模板分别置于各自的反应体系中，并同时置入PCR仪进行扩增，扩增完毕后由PCR仪自动得出检测结果；检测结束后，根据噪音情况设定和调整基线及阈值并利用随机软件进行分析，建立标准曲线，根据荧光曲线和Ct值判断结果。本发明检测方法及试剂盒具有高灵敏度及相对的高特异性，而且可以精确定量检测标本中家禽干扰素刺激因子的mRNA表达量。
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公开(公告)号：CN112048006A
公开(公告)日：2020-12-08
申请号：CN202010937821.3
申请日：2020-09-08
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/165 , C07K16/10 , G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种IBV特异性中和表位抗原多肽，所述多肽为环状多肽，所述多肽的氨基酸序列为CSCPYVSYGRFCIQPDGSIKQC。本发明还公开了一种IBV特异性抗体及其制备方法。本发明还公开了一种替代中和效力测定的ELISA方法。本发明还公开了一种ELISA检测试剂盒，本发明应用建立的pELISA方法检测IBV抗体，并发现其与抗IBV中和抗体呈正相关，本发明可以用于IBV疫苗免疫效果的评价，IBV感染鸡的抗体水平测定，从而有益于鸡群健康管理等。
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公开(公告)号：CN111534547A
公开(公告)日：2020-08-14
申请号：CN202010426111.4
申请日：2020-05-19
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/70
Abstract: 本发明涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F2的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建FAdV-4-F2基因重组杆状病毒表达载体；（2）表达重组FAdV-4蛋白的杆状病毒包装和传代；（3）将携带有FAdV-4-F2基因的杆状病毒基因组转染进sf9细胞，27℃培养箱中培养5-7天，观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞裂解液，离心去沉淀，作为种毒保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒扩大培养。本发明利用杆状病毒表达系统构建了含F2基因的重组杆状病毒穿梭载体，将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-F2，通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定重组蛋白F2的表达。
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