火鸡疱疹病毒株rHVT-H9HA及其构建方法

    公开(公告)号:CN105002146A

    公开(公告)日:2015-10-28

    申请号:CN201510490223.5

    申请日:2015-08-11

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及表达H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白的重组火鸡疱疹病毒(HVT)rHVT-H9HA及其构建方法,所述疫苗株rHVT-H9HA的保藏号为CGMCC No:10907。从载体pEGFP-C1中分离GFP表达盒插入到HVT基因组中,获得重组病毒rHVT-GFP。通过再次同源重组将H9N2亚型AIV流行株A/Chicken/Jiangsu/WJ57/2012的HA基因替换重组病毒rHVT-GFP的GFP基因,挑选不带荧光的重组病毒,获得稳定表达H9亚型AIV HA基因的火鸡疱疹病毒株rHVT-H9HA。该重组病毒株成本低、安全性好、免疫期长,适合于疫苗的大规模生产,可用于制造疫苗。

    表达传染性支气管炎病毒S1蛋白的重组新城疫疫苗株rAI4-S1及其构建方法

    公开(公告)号:CN103468651A

    公开(公告)日:2013-12-25

    申请号:CN201310465927.8

    申请日:2013-10-08

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 表达传染性支气管炎病毒S1蛋白的重组新城疫疫苗株rAI4-S1及其构建方法,所述新城疫疫苗株rAI4-S1,它的保藏号CGMCC No:8054。其构建方法是利用已建立的基因VII型NDV致弱毒AI4株的反向遗传操作平台,将SEQ ID NO.7所示的序列插入AI4株基因组全长转录载体pNDV/AI4中,得到含有传染性支气管炎病毒S1基因的重组新城疫病毒基因组全长cDNA克隆pNDV/AI4-S1。经转染获得的重组病毒rAI4-S1在鸡胚上具有较高的繁殖滴度,连续传代仍能稳定表达S1蛋白,适合于疫苗的大规模生产,可用于制造疫苗。

    新城疫病毒rNDV-H52AH9及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN103074306A

    公开(公告)日:2013-05-01

    申请号:CN201310044271.2

    申请日:2013-02-04

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及新城疫病毒(NewcastleDiseaseVirus)rNDV-H52AH9,保藏号CGMCC No:6654。本发明以新城疫病毒致弱株AI4为载体,将H5和H9亚型禽流感病毒的HA基因通过口蹄疫病毒2A基因串联在一起后插入到含有AI4基因组全长的转录载体pNDV/AI4中,获得重组NDV基因组全长克隆pNDV/AI4-H52AH9。经反向遗传操作获得了重组病毒rNDV-H52AH9,该重组病毒在鸡胚上具有较高的繁殖滴度,且能同时稳定表达H5和H9亚型禽流感病毒的HA蛋白,为AI和ND的多联重组基因工程活载体疫苗的研制与应用奠定了基础。

    基因Ⅵb亚型新城疫病毒致弱株ⅥbI4及其构建方法

    公开(公告)号:CN102776156A

    公开(公告)日:2012-11-14

    申请号:CN201210240399.1

    申请日:2012-07-12

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及基因Ⅵb亚型鸽源新城疫病毒致弱株ⅥbI4及其构建方法。所述基因Ⅵb亚型鸽源新城疫病毒致弱株ⅥbI4,它的保藏号CGMCCNo:6149。本发明涉及应用反向遗传技术,利用含有鸽源新城疫病毒JS/07/04/Pi基因组全长的转录载体pTVT/071204,对其F基因进行致弱突变后获得转录载体ApTVT/071204,再将新城疫病毒rNDV/I4的NP、P和L基因片段替换ApTVT/071204上的对应部分,得到重组质粒ApTVT/ⅥbI4,该质粒与辅助质粒共转染BSR-T7/5细胞后成功拯救出重组病毒ⅥbI4。该病毒在鸡胚上具有较高的繁殖滴度,适合于疫苗的大规模生产,可用于制造疫苗。

    一种分泌抗流感病毒PB1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

    公开(公告)号:CN120041397A

    公开(公告)日:2025-05-27

    申请号:CN202411807180.4

    申请日:2024-12-10

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种分泌抗流感病毒PB1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。所述杂交瘤细胞株命名为4F7,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:C2024115。该杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体4F7属IgG1亚类,特异性靶向流感病毒PB1蛋白C端区,629NPFVS633为其识别的核心抗原表位,在禽流感病毒、人流感病毒和其他哺乳动物源流感病毒中均具有高度的序列保守性。所述单克隆抗体还能够良好地应用于IFA、WB、IP/Co‑IP等试验,且广谱性识别H5、H7、H9亚型禽流感病毒和H1、H3亚型人流感病毒等多种不同流感病毒的PB1蛋白,在PB1蛋白功能与抗病毒制剂研究及流感病毒的广谱性检测方面具有较高的应用潜力。

    一种兽用疫苗复合佐剂及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN119345348A

    公开(公告)日:2025-01-24

    申请号:CN202411528998.2

    申请日:2024-10-30

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种兽用疫苗复合佐剂及其制备方法和应用,所述疫苗复合佐剂中的活性成分为含锰复合物和Mincle激动剂。本发明的兽用疫苗复合佐剂将Mn与TDB组合,使TDB佐剂的免疫增强效果。所述复合佐剂可以诱导强烈免疫应答反应,显著提升了免疫效果,且使用无残留损害。本申请中利用H7N9亚型禽流感灭活病毒为抗原,与复合佐剂混合后制备的H7N9疫苗与单独使用DDA‑TDB相比,能增强机体的体液免疫和细胞免疫应答反应,减少病毒载量,提高保护水平,为兽用疫苗的生产提供产品和技术支撑。

    一株广谱结合多分支H5Nx亚型禽流感病毒HA蛋白的单克隆抗体及应用

    公开(公告)号:CN119241694A

    公开(公告)日:2025-01-03

    申请号:CN202411444167.7

    申请日:2024-10-16

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一株广谱结合多分支H5Nx亚型禽流感病毒HA蛋白的单克隆抗体及应用。所述单克隆抗体命名为1G10,属IgG1亚类,包含重链可变区和轻链可变区,其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.5‑7所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3,轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.8‑10所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。所述单克隆抗体在间接免疫荧光试验、蛋白免疫印迹试验及中和试验中均能特异性识别HA蛋白。另外,所述单克隆抗体能够与2.3.2.1d、2.3.4.4b、2.3.4.4d等不同HA基因进化分支的H5N1、H5N6、H5N8等H5Nx亚型禽流感病毒发生特异性血凝抑制反应,表明该1G10单克隆抗体识别的抗原表位是H5亚型禽流感病毒的一个广谱性中和表位。通过鸡胚免疫逃逸试验和序列比对,筛选出1G10单克隆抗体识别的中和抗原表位包含HA蛋白第170和231位氨基酸位点,其突变显著影响抗原性。

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