公开(公告)号：CN107164373B

公开(公告)日：2020-07-24

申请号：CN201710312593.9

申请日：2017-05-05

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 李海燕 ,  李晓薇 ,  王法微 ,  刘伟灿 ,  王南 ,  董园园 ,  刘秀明 ,  姚娜 ,  刘欣 ,  肖洪庆 ,  侯心悦

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/82 ,  C12N15/62 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82 ,  A01H6/54

Abstract: 本发明公开了一种大豆低温诱导启动子SP5，它是以大豆中的Glyma18g03930基因启动子区179 bp、Glyma09g29840基因启动子区382 bp、以及35S核心启动子Core CaMV 35S连接构建而成，命名为Synthetic Promoter 5，简称为SP5。在转基因烟草中鉴定SP5启动子驱动报告基因GUS的表达情况表明，SP5启动子可以受干旱、盐、盐碱、ABA以及低温胁迫所诱导，对低温尤其敏感。本发明构建了一种大豆人工合成启动子SP5，其对低温胁迫尤其敏感，可直接应用于农作物转基因抗逆育种。

公开(公告)号：CN105671016B

公开(公告)日：2019-07-26

申请号：CN201610115975.8

申请日：2016-03-02

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 王秀然 ,  许春晓 ,  卢天成 ,  王晓龙 ,  王浩 ,  王岩 ,  李海燕 ,  李校堃 ,  孙喆 ,  李晓薇 ,  孙天旭 ,  王法微 ,  杨晶 ,  王艳芳 ,  刘秀明 ,  付玉芹

IPC: C12N9/14 ,  A61K39/10 ,  A61P31/04

Abstract: 提高S‑腺苷‑L‑半胱氨酸水解酶免疫原性的方法及六糖修饰ahcy蛋白，涉及蛋白免疫原性领域，其目的是为了给布鲁氏菌提供更好的疫苗候选抗原。该方法为：4℃将六糖与高碘酸钠按摩尔比1:1混合在pH 6.0的PBS中反应1h；室温将EDC与NHS按摩尔比1:1加入上述体系中反应6h；室温将ahcy蛋白按ahcy蛋白与六糖摩尔比1:1000加入上述体系中过夜反应；4℃在50mmol/L、pH8.0～9.6的碳酸盐溶液中透析5h，再在50mmol/L、pH7.0～8.0的PBS中透析一天。获得的六糖修饰ahcy蛋白的刺激增殖指数、抗体效价、刺激小鼠脾淋巴细胞后产生的IFN‑γ和IL‑2的量都大大提高。

公开(公告)号：CN105002195B

公开(公告)日：2018-08-10

申请号：CN201510462709.8

申请日：2015-08-01

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 李海燕 ,  李晓薇 ,  李玉 ,  王法微 ,  赵竟男 ,  李校堃 ,  王琦 ,  刘秀明 ,  姚娜 ,  孙天旭 ,  董园园 ,  王南 ,  王秀然 ,  卢天成 ,  王岩 ,  孙喆

IPC: C12N15/62 ,  C07K19/00 ,  C12N15/80 ,  A61K39/00 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了一种猪蓝耳病重组疫苗，将猪蓝耳病病毒ORF3基因和ORF5基因串联，构建了融合基因ORF3‑ORF5，插入真菌特异性双T‑DNA安全表达载体pCB130NG中，获得一种表达载体pCB130NG‑ORF3‑ORF5，利用PEG法、农杆菌介导法或电击法转化食药用真菌原生质体，经鉴定为阳性的菌丝体，培养获得T1代子实体，利用PCR筛选出只含目的基因而不含选择标记基因的子实体个体，培养至T2代，获得稳定表达猪蓝耳病病毒基因的转基因食药用真菌。通过转基因真菌菌丝的发酵培养，离心收集菌丝，烘干或冻干后，粉碎制备猪蓝耳病重组疫苗。利用本发明生产的猪蓝耳病疫苗各批次间质量差异小、产量大、成本低，且可以直接通过口服饲喂动物，具有广泛的社会效益和经济效益。

公开(公告)号：CN105002196B

公开(公告)日：2018-07-24

申请号：CN201510462722.3

申请日：2015-08-01

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 李海燕 ,  李晓薇 ,  李校堃 ,  李玉 ,  王法微 ,  杨贺 ,  孙墨可 ,  刘欣 ,  高延妍 ,  刘秀明 ,  姚娜 ,  董园园 ,  王南 ,  刘炜灿

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/80 ,  C12N1/15 ,  A61K39/187 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了一种猪瘟重组疫苗，通过构建猪瘟病毒E2基因和Erns基因串联的真菌特异性双T‑DNA安全表达载体；利用PEG法、农杆菌介导法或电击法转化食药用真菌原生质体，所述的食药用真菌为金针菇、平菇和蛹虫草、灵芝；经鉴定为阳性的菌丝体，培养获得T1代子实体，利用PCR筛选出只含目的基因而不含选择标记基因的子实体个体，培养至T2代，获得稳定表达猪瘟病毒基因的转基因食药用真菌。通过转基因真菌菌丝的发酵培养，制备猪瘟重组疫苗。利用本发明生产的猪瘟疫苗各批次间质量差异小、产量大、成本低，具有广泛的社会效益和经济效益。

公开(公告)号：CN107164373A

公开(公告)日：2017-09-15

申请号：CN201710312593.9

申请日：2017-05-05

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 李海燕 ,  李晓薇 ,  王法微 ,  刘伟灿 ,  王南 ,  董园园 ,  刘秀明 ,  姚娜 ,  刘欣 ,  肖洪庆 ,  侯心悦

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/82 ,  C12N15/62 ,  A01H5/00

CPC classification number: C07K14/415 ,  C12N15/8273

Abstract: 本发明公开了一种大豆低温诱导启动子SP5，它是以大豆中的Glyma18g03930基因启动子区 179 bp、Glyma09g29840基因启动子区382 bp、以及35S核心启动子Core CaMV 35S连接构建而成，命名为Synthetic Promoter 5，简称为SP5。在转基因烟草中鉴定SP5启动子驱动报告基因GUS的表达情况表明，SP5启动子可以受干旱、盐、盐碱、ABA以及低温胁迫所诱导，对低温尤其敏感。本发明构建了一种大豆人工合成启动子SP5，其对低温胁迫尤其敏感，可直接应用于农作物转基因抗逆育种。

公开(公告)号：CN106432497A

公开(公告)日：2017-02-22

申请号：CN201610967889.X

申请日：2016-11-05

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 姜潮 ,  李校堃 ,  李海燕 ,  刘秀明 ,  王立勇 ,  姚娜

IPC: C07K16/28 ,  C12N15/82

CPC classification number: C07K16/2887 ,  C12N15/8205

Abstract: 本发明公开了一种利用红花悬浮细胞系统生产CD20单链抗体的方法。本发明按照植物偏好性密码子，人工合成CD20单链抗体基因，将其连接到含有35S启动子的植物表达载体pBasta上，采用农杆菌介导的方法转化红花愈伤组织，筛选出具有抗性的愈伤组织然后进行悬浮细胞培养，最后获得大量悬浮细胞，提取蛋白进行纯化并检测，结果表明，利用红花悬浮细胞表达的CD20抗体的活性高于利用拟南芥种子系统表达的抗体活性，利用红花悬浮系统表达突变后的TK-CD20活性明显高于原有序列的表达活性。

公开(公告)号：CN102776226B

公开(公告)日：2015-04-29

申请号：CN201210254254.7

申请日：2012-07-23

Applicant: 吉林农业大学 ,  温州医学院

Inventor： 刘秀明 ,  李海燕 ,  李校堃 ,  杜淑环 ,  万秋

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/62 ,  C07K14/435 ,  A01H5/00

Abstract: 本发明公开了一种抗菌肽天蚕素B（CB）及杂合抗菌肽天蚕素B（CB2、CB3），在植物表达体pCAMBIA1390中插入了CaMV35S启动子，获得pCAMBIA1390R；分别插入CB、CB2、CB3基因，通过农杆菌介导转化至苜蓿中，获得了转基因苜蓿。通过实验证明，CB、CB2、CB3基因已整合到苜蓿的基因组中，转基因苜蓿对金黄色葡萄球菌、沙门杆菌有抑制活性，而野生型苜蓿没有抑制活性， CB3转基因植株的抑菌活性最高。苜蓿本身就具有抗逆性强、适应范围广、利用年限长、再生性强及每年可以收获多次的特点；而由于转基因苜蓿转入了抗菌肽基因，更加提高了其抗病能力，利用转基因苜蓿作为生物反应器生产抗菌肽天蚕素B，可以更大地降低了生产抗菌肽天蚕素B的成本。

公开(公告)号：CN103720743A

公开(公告)日：2014-04-16

申请号：CN201410019550.8

申请日：2014-01-16

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 李校堃 ,  李海燕 ,  官丽莉 ,  杨晶 ,  王法微 ,  姜潮 ,  杜林娜 ,  王艳芳 ,  董园园 ,  姚娜 ,  刘秀明 ,  王南

IPC: A61K36/48 ,  A61K36/286 ,  A61K9/06 ,  A61K47/38 ,  A61P17/02

Abstract: 本发明分开了油体的凝胶基质，它是由以下述组份按重量%组成：羧乙基纤维素1%—5%、甘油5%—40%、尼泊金甲酯0.01%—0.1%、尼泊金丙酯0.01%—0.1%、加注射用水至100%；它可以混入30%的植物油体，制成的植物油体凝胶剂，37℃保存12个月，凝胶剂无霉变现象，其外观、pH等理化指标均未发生变化；本发明还提供了含有aFGF的植物油体，它是将人aFGF的核苷酸序列连接到油体表达载体p1390ONE的油体蛋白核苷酸序列的3’端，转入油料作物油体中表达了aFGF，提取油体，与油体的凝胶基质混合，制得的含有aFGF的植物油体凝胶剂，4℃保存12个月，aFGF活性无明显变化。

公开(公告)号：CN1986817B

公开(公告)日：2010-09-01

申请号：CN200610169598.2

申请日：2006-12-25

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 李校堃 ,  李海燕 ,  庞实锋 ,  杨晶 ,  刘秀明 ,  田海山 ,  薛萍 ,  王晓杰

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/62 ,  C12N15/09 ,  C12N15/29 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明采用体外基因重组方法，将人酸性成纤维细胞生长因子(Human acidic fibroblast growth factors haFGF)与油体蛋白基因融合合成，构建成一种植物油体表达载体，建立一种油体蛋白遗传转化表达体系，用根瘤农杆菌转化了拟南芥、红花、大豆、黑豆、油菜，并获得了转基因植株，转基因红花、油菜的分子生物学检测证明外源基因的整合和表达，经活性检测，获得的重组蛋白具有生物活性，其生物活性与人aFGF标准品活性相当。本发明还提供一种方法在植物种子中表达酸性成纤维细胞生长因子，这种方法可以提供一种经济的方法生产酸性成纤维细胞生长因子，可开发出一种医类新药。

公开(公告)号：CN101768597A

公开(公告)日：2010-07-07

申请号：CN201010106092.3

申请日：2010-02-05

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 李校堃 ,  李海燕 ,  杨晶 ,  刘秀明 ,  王艳芳 ,  李天航 ,  熊丽东

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/82 ,  C12N1/21 ,  A01H5/06 ,  C07K14/50 ,  A23L1/29 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种融合基因片段rolB-FGFs，它是由rolB基因和根据植物密码子的偏好性设计的FGFs基因组成；引入无抗生素标记的PIM基因、人分泌型碱性磷酸酶信号肽(SEAP)基因，构建了无抗生素标记的植物分泌型双元表达载体，转化至发根农杆菌中，以植物作为宿主，采用发状根系统来表达FGFs，从发状根和培养液中分别纯化出具有活泩的FGFs，可产业化生产FGFs，提高了发状根诱导率、蛋白表达量、产率和稳定性，无抗生素标记，保护了环境；采用人参作为宿主生产的含FGFs人参发状根，具有人参和FGFs双重的药理作用，是一种较佳保健品及药品，用于功能性食品和药品的开发与应用具有广阔的前景。